cck8法检测细胞增殖详细操作步骤

以cck8法检测细胞的增殖能力为例：

一、准备cck8检测细胞增殖实验器材

实验仪器：CO2恒温培养箱、光学倒置显微镜、超净工作台、血球计数板

实验试剂与耗材：DMEM/F12培养基、胎牛血清、胰酶、6cm细胞培养皿、抗生素、96孔细胞培养板、CCK-8

二、cck8检测操作步骤

1、细胞复苏

（1）将ddH2O预温至37℃。

（2）戴上手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管，立即投入37℃ddH2O中，轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

（3）完全溶解后，75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

（4）在超净台中，在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基，打开冻存管，将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中，常温1000 rpm离心3分钟，吸除上层的培养液。

（5）1mL培养基重悬细胞沉淀，轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中，补足培养基至5 mL，置于37℃、5%CO2培养箱培养。

（6）48小时后换液，细胞融合接近80%时即可传代。

2、细胞增殖待测细胞预处理

细胞放在专用的培养基内，在适宜待测细胞温度湿度的培养箱中培养。

3、CCK-8检测实验

(1)取生长状态良好的各组细胞用0.25%胰酶消化后，细胞计数。

(2)将细胞种到96孔板中，密度为7000个细胞/孔。

(3)各组细胞在检测时间点时，每孔加1/10体积CCK-8，在37℃、5％CO2培养箱中培养2小时。

(4)选择450 nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

(5)通过Gradpad软件计算并绘制细胞增殖曲线图。