冰冻切片制片的影响因素

1、组织取材对制片的影响

组织取材大小：组织块大小要适宜，冷冻切片机内切片刀移动的范围有一定的限制，超出其范围时，易致切片不全，一般情况下，冰冻切片的组织大小为1.5*1.5 cm厚2 mm。（卵巢及脂肪组织可稍微大些）组织块过大，切片时阻力过大，易产生皱折、刀痕，组织易崩碎，增加制片难度，影响观察诊断。

组织内含过多的脂肪或坏死组织：脂肪或坏死组织较一般的组织冷冻的温度要低些，当活组织达到所需的温度时，脂肪或坏死组织还比较软，从而影响切片的完整性和检测发出的时间。

组织块过冷：组织冷冻过度易致切片破碎或呈粉沫状，不能制作一张完整的切片。

组织块冷冻不均匀：组织块放入液氮时不能保持水平状态且液氨量不足的情况下，可产生此现象。

2、冷冻时间、温度对制片的影响

根据组织块的大小性质确定冷冻时间一般13~17 s(使用液氮者)，若组织较大或脂肪组织时间可适当长些，而甲状腺、脑组织和淋巴组织等冷冻的时间相对要短些。（参考上文各组织冰冻切片的适宜温度）3、染色对制片的影响

尤以细胞核的染色最为关键，在寒冷的冬季，室温过低时，影响核的着色，可适当加温，用以增色；苏木毒的酸碱应适宜，经常观察其染液的n值，过碱时应及时更换，盐酸酒精分化活度，时间控制到位，否则易造成核着色不佳，染色质不清晰，影响诊断的准确性。

4、冰晶的形成对制片的影响

常见原因：取决于组织含水量的大小，尤以组织细胞水肿，淋巴结，纵隔肿瘤，卵巢肿瘤为甚，送检取材过程中接触水源，同是造成冰晶形成的原因。

解决方法：使用液氮时间上控制到位，保证一次冻透标本1.组织送检取材时，尽量避开水源2.如遇含水量高的标本时，应尽量用干纱布吸干水分后再行冷冻。

5、切片皱缩或卷缩对制片的影响

常见的原因：①刀锋变钝。②防卷板粘有异物，防卷板的作用是防止切片卷缩，但若粘有异物，切片时组织会被挤压而缩在一起。③防卷板与刀锋的位置不平行、不协调。④组织块包埋不完全，缺乏支撑作用。

解决方法:①注意检查刀具，及时更换刀口，定期磨刀。②保持防卷板的清洁，每做一例冷冻切片，均应将刀口及防卷板拭擦干净，防止切片的污染和切片皱缩。③调整刀、防卷板的位置，保证两者平行，且防卷板次刀锋前0.2 mm左右。包埋组织应完全，没法切片者再滴加包埋胶。

6、组织块脱落对切片的影响。

冷冻切片一般要求在30min内发出病理报告，以便手术医生能尽快选择手术方式。

常见原因:①组织内含过多的坏死组织。组织细胞坏死崩解后，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分逸出，坏死组织失去支撑作用，染色时组织容易脱落，②因际液浓度过低。③载坡片不干净。④切片太厚。

处理方法:①避免组织内带有坏死组织。②定期更换固定液。股每周更换一次，例数较多者，适当增加次数。③保持载玻片干净，平时应将玻片盖好，防止就发申或其它异物的污染。④调好切片的厚度，切片厚度以5~7μm为宜。