R&D Systems支原体污染检测新方法（ELISA）专辑

R&D Systems支原体污染检测新方法（ELISA）专辑不需要特殊仪器，可同时检测8种支原体，并避免支原体检测出现假阴性和假阳性的方法前言：      支 原体污染是细胞培养中令人头痛的问题，有研究表明25%的细胞系中感染了支原体，而研究人员却并不知晓！支原体检测常规采用PCR的方法，虽然灵敏，但假 阳性和假阴性率高，面对得之不易的细胞，研究人员往往很难取舍。对此，R&D Systems 公司在这个领域有重大突破，利用Elisa技术研发的新产品—MycoProbe® Mycoplasma Detection Kit（Catalog # CUL001B）可以高通量（96T*8种支原体）快速（检测时间也仅需要4.5个小时）有效地检测支原体污染，并且避免出现假阴性和假阳性现象。      支 原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。细胞培养（特别是传 代细胞）被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，又不能通过可视 法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、 培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。      一．R&D Systems  MycoProbe®试剂盒原理： 该试剂盒运用“Elisa夹心法”的基本原理，首先将样品16S ribosomal RNA (rRNA)标上生物素标签和地高辛标签，然后将其加入预先包被在孔板上的链亲和素的微孔板进行捕获，同时加入碱性磷酸酶标记的抗地高辛检测抗体检测，最 后加入底物显色，通过比色法得出检测结果。

二．R&D Systems MycoProbe®试剂盒的特点和优势：      1. 试 验结果准确。以往采用PCR法检测支原体污染时，多重扩增可导致假阳性，而且过量样品的使用可导致假阴性。同时运用荧光染色方法时由于支原体吸附在细胞上 而不易上色从而检测不到支原体的污染（假阴性）。而R&D Systems MycoProbe®试剂盒，通过“核苷酸夹心”原理的新方法，采用标记了碱性磷酸酶的寡核苷酸探针与16S核糖体RNA杂交，随后检测底物证实支原体是 否存在，可以有效避免了PCR法出现的假阴性和假阳性现象，检测结果准确。 

PCR与MycoProbe®方法检测支原体结果对比：

2. 省时省力更经济。通过PCR方法检测支原体污染通 常需要1天时间。通过培养法检测，虽然检测结果较好，但是培养过程需要时间很长，并且操作繁琐。以上两种主要采用的方法均耗时耗力。而通过R&D Systems MycoProbe®试剂盒检测支原体，方法简单易操作，检测时间仅仅需要4-5小时，并且价格低廉。      3.高灵敏度和高通量。该试剂盒具有较高灵敏度（下图为与PCR法的比较），同时使用标准的96微孔板形式一次可以检测96个样本。