电转感受态菌TG1的制备

1从微量培养基平皿中挑取单个菌落，接种于5ml 2×YT培养基(17g蛋白胨，10g Bactoyeast,5g NaCl，加水至1 000ml)中，37℃振荡培养过夜。 2取上述过夜菌1∶100稀释接种入500ml新鲜的2×YT培养液中，37℃振荡培养至OD=05~07，约25~3h。 3将上述带有菌液的三角瓶置冰浴15~30min。4 000r/min 4℃离心20min。 4去上清，用500ml预冷的无菌的1mmol/L Hepes(pH值70)溶液重悬细胞沉淀。4 000r/min 4℃离心20min。 5 4℃离心20min，用10ml含有10%甘油的1mol/L Hepes(pH70)溶液重悬细胞。 6 4 000r/min 4℃离心，最后用1ml 10%甘油重悬细胞沉淀，总量约2ml左右。 7分装小管，每管100μl，置于冰浴待用，或立即冻于干冰中，存放于-70℃。