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细胞技术

Gomori染色(骨型碱性磷酸酶染色)

2025-02-27 细胞技术 加入收藏
Gomori染色是用于检测细胞中骨型碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase BALP)的一种染色法,具体内容如下:一、主要试剂准备:PB

Gomori染色是用于检测细胞中骨型碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase BALP)的一种染色法,具体内容如下:

一、主要试剂准备:

PBS、丙酮(或甲醛、95乙醇)、3%β-甘油酸钠、2%巴比妥钠、2�Cl2、2%MgSO4、2%硝酸钴、1%硫化铵(纯的硫化铵也为液体,且由于其有强烈的刺激性味道,建议现配现用)

二、实验步骤:

1、将无菌玻片放在细胞的培养皿中,待细胞生长至半汇合后取出。也可以选择直接在培养皿或培养板中染色,此时就不需要放入无菌玻片了;

2、PBS冲洗后用冷丙酮固定10min,固定后再用PBS冲洗3次。也可以选择用95%的乙醇或者甲醛固定,固定时最好放在4℃的条件下;

3、配制孵育液:

3%β-甘油酸钠:5ml 2%巴比妥钠:5ml 2%CaCl2:10ml 2%MgSO4:1ml

蒸馏水:10ml

4、入孵育液中,37℃,孵育4-6小时,PBS冲洗3次;

5、2%硝酸钴浸泡5min,PBS冲洗3次;

6、1%硫化铵浸泡2min,PBS冲洗3次,自然干燥,封固;

7、镜下观察染色结果。胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或者块状沉淀。

三、注意事项:

1、冲洗时应该间接冲洗,如果是玻片就在玻片周边的液体中用吸管吸打,间接冲洗,培养皿或培养板就用枪头在培养皿或培养板周边缓慢吹打,这样细胞就不容易脱片或是吹打掉。

2、硝酸钴带6个水,硫酸铵带7个水,称重时不用去掉水的重量,直接称量。1%硫化铵直接用原液配成1%的溶液,原液当作100%,不用按硫来计算。 (责任编辑:大汉昆仑王)


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