黏粒文库的扩增和贮存(在液体培养基内扩增)
原理不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不稳定的克隆会发生重排，而生长慢的克隆可能会从文库中完全消失。材料与
原理
不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不稳定的克隆会发生重排，而生长慢的克隆可能会从文库中完全消失。
材料与仪器
λ 噬菌体包装反应 大肠杆菌接种菌株
甘油
卡那霉素的琼脂平板 TB 培养基 Sorvall GSA 转头或同类产品 冻存管
甘油
卡那霉素的琼脂平板 TB 培养基 Sorvall GSA 转头或同类产品 冻存管
步骤
一、材料
1. 缓冲液与溶液
甘油
2. 培养基
含 25 μg/ml 卡那霉素的琼脂平板
TB 培养基
含 25 μg/ml 卡那霉素的 TB 培养基
3. 离心机与转头
Sorvall GSA 转头或同类产品
4. 专用设备
冻存管
5. 载体及菌株
λ 噬菌体包装反应
适宜的大肠杆菌接种菌株（如 XLl-Blue、ED8767、NM554、DH5αMCR)
二、方法
预培养
1. 计算能产生 3 万~ 5 万个转化菌落的包装反应体积。
2. 取若干无菌试管，在每管中加入 0.2 ml 接种细菌，接着加入包装反应液并使其达到步骤 1 确定的体积。
3. 将试管在 37℃ 温育 20 min。
4. 各管中分别加入 0.5 ml TB, 继续温育 45 min。
在含 25 μg/ml 卡那霉素的 TB 培养基中扩增
5. 分别取 0.25 ml 各种感染的细胞，接种于 100 ml 含 25 μg/ml 卡那霉素的 TB 培养基 中，置于 250 ml 培养瓶。
6. 37℃ 剧烈振摇培养，使细胞密度至 OD600=0.5~1.0。
7. 合并所得培养物，5000 g ( 5500 r/min，Sorvall GSA 转头）4℃ 离心 10 min，回收细胞，再用 1/10 原体积的 TB 重悬细胞。
8. 向细胞悬液中加入无菌甘油至终浓度为 15% (V/V)。颠倒封好口的试管数次，充分混匀悬液。将细菌悬液以 0.5~1.0 ml 的体积分装于数个无菌管，封好管口，-70℃ 保存。
9. 进行筛选时，于 37℃ 迅速融化一小份冻存细胞，按毎张膜 3 万~ 5 万个细菌的密度铺到编好号码的滤膜上。在影印滤膜上裂解菌落，然后将滤膜与标记探针杂交。
1. 缓冲液与溶液
甘油
2. 培养基
含 25 μg/ml 卡那霉素的琼脂平板
TB 培养基
含 25 μg/ml 卡那霉素的 TB 培养基
3. 离心机与转头
Sorvall GSA 转头或同类产品
4. 专用设备
冻存管
5. 载体及菌株
λ 噬菌体包装反应
适宜的大肠杆菌接种菌株（如 XLl-Blue、ED8767、NM554、DH5αMCR)
二、方法
预培养
1. 计算能产生 3 万~ 5 万个转化菌落的包装反应体积。
2. 取若干无菌试管，在每管中加入 0.2 ml 接种细菌，接着加入包装反应液并使其达到步骤 1 确定的体积。
3. 将试管在 37℃ 温育 20 min。
4. 各管中分别加入 0.5 ml TB, 继续温育 45 min。
在含 25 μg/ml 卡那霉素的 TB 培养基中扩增
5. 分别取 0.25 ml 各种感染的细胞，接种于 100 ml 含 25 μg/ml 卡那霉素的 TB 培养基 中，置于 250 ml 培养瓶。
6. 37℃ 剧烈振摇培养，使细胞密度至 OD600=0.5~1.0。
7. 合并所得培养物，5000 g ( 5500 r/min，Sorvall GSA 转头）4℃ 离心 10 min，回收细胞，再用 1/10 原体积的 TB 重悬细胞。
8. 向细胞悬液中加入无菌甘油至终浓度为 15% (V/V)。颠倒封好口的试管数次，充分混匀悬液。将细菌悬液以 0.5~1.0 ml 的体积分装于数个无菌管，封好管口，-70℃ 保存。
9. 进行筛选时，于 37℃ 迅速融化一小份冻存细胞，按毎张膜 3 万~ 5 万个细菌的密度铺到编好号码的滤膜上。在影印滤膜上裂解菌落，然后将滤膜与标记探针杂交。
