【实验技巧】BCA 法蛋白定量

BCA 蛋白定量法是实验室常用的蛋白质定量方法。Invent 所有蛋白提取试剂盒提取的蛋白均可使用 BCA 法进行定量！那么今天小编就手把手的教大家该如何用 BCA 来定量！

BCA 法原理

碱性条件下，蛋白将 Cu2+还原为 Cu+，Cu+与 BCA 试剂相互作用形成紫色的络合物，该水溶性的复合物在 562nm 处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。

实验操作具体步骤

1. 梯度稀释牛血清白蛋白（BSA）标准品（具体操作按试剂盒中说明操作）

2. 制备 BCA 工作液（具体操作按说明书进行）

3. 将各个稀释浓度的蛋白质标准品和待测蛋白质样品加入到微孔板或试管中，分别加入 BCA 工作液（比例参照试剂盒说明书）混匀。

4. 密封后，37℃ 保温 30-60 min

5. 冷却到室温，以空白为对照，测量样品在 562nm 或该波长附近的吸光值

6. 将各个标准品和待测蛋白质样品在 562nm 处的吸光值减去空白标准品在 562nm 处的平均吸光值。

浓度计算步骤

1. 输入相对应的标准曲线值和相应的蛋白样品值。（图中所示均为举例说明，具体数据参照自己的实验结果）选定标准曲线的 OD 值和标准品蛋白浓度。

2. 点击表头上的插入-图表-XY 散点图，点击确定。

3. 完成后会弹出一个图表，点击图表里面的散点，右键添加趋势曲线。

4. 完成后弹出设置趋势线格式，点击选勾最底下显示公式（E）以及显示 R 平方值。则在图表标题中显示出公式和 R2 值来。一般 R2 值越接近 1 代表你的标准曲线做得越好，根据标准曲线带入的样品 OD 值测出的蛋白浓度也越准确。R2 值越接近 1 越好，一般要求为 0.99 几左右。

5. 将样品 OD 值代入标准曲线的公式中，推导即得到待测样品蛋白的浓度。以 C1 蛋白样品 OD 值为例，按照图中模式代入公式，点击 enter 即为终结果。