DNA导入哺乳动物细胞常见的方法
名称 机制 转染效率 用途 优缺点 影响因素 磷酸钙转染法 内吞作用 20%细胞被转染 瞬时表达 1、简单有效 2、适用于贴壁、非贴壁细胞 3、常作首选方法
名称
| 机制
| 转染效率
| 用途
| 优缺点
| 影响因素
|
磷酸钙转染法
| 内吞作用
| 20%细胞被转染
| 瞬时表达
| 1、简单有效
2、适用于贴壁、非贴壁细胞
3、常作首选方法
| 1、Ca2 ,DNA浓度
2、PH值,沉淀反应时间
3、氯喹,甘油和丁酸钠处理
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DEAE葡聚糖转染法
| 抑制核酸酶
内吞作用
| 在BDC-1,CV-1和COS细胞中较高
| 瞬时表达
| 操作简单
| 1、需高浓度DNa
2、DEAE葡聚糖浓度
3、温育时间
|
Poly-brene转染法
| 不清楚
| 低分子量DNA转染率高于磷酸钙法
| CHO细胞的稳定转化子
| 能得到较多的稳定转化子
| 1、受体细胞类型
2、转染调控信号
3、DNA浓度
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原生质体融合
| 胞膜融合
| 50-100%转染,稳定子得率为0.2-0.02%
| 瞬时表达
稳定表达
| 1、操作复杂
2、不能进行共转染
3、慎用于筛选营养缺陷型变异株
| 1、溶菌酶、PEG浓度
2、温育时间
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电穿孔
| 高压在膜上形成微孔
| 效率较高
| 瞬时表达
稳定转化
| 1、需精密仪器
2、可用于动物、植物细胞和细菌
| 1、电场强度
2、脉冲长度
3、温度,DNA浓度
4、培养液
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脂质体
| 脂膜融合
| 50-60%转染
| 瞬时表达
稳定转化
| 1、操作简单
2、可用于体内试验
| 1、脂质体质量
2、DNA浓度
|
胞核微注射法
| 直接注射
| 50-100%转染
| 稳定转化
| 1、需要特殊仪器
2、处理样品数量少
3、高效
| 1、注射技术
2、DNA浓度 |