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细胞技术

人体间期细胞X―小体的制备

2025-03-05 细胞技术 加入收藏
一、原理 1949年Barr等发现,在雌性体细胞中的两条X染色体有一条(或这条的大部分)处于凝集不活动状态,从而形成X-小体(或称X-染色质、性染色质

 

一、原理     1949年Barr等发现,在雌性体细胞中的两条X染色体有一条(或这条的大部分)处于凝集不活动状态,从而形成X-小体(或称X-染色质、性染色质、Barr小体)。进而发现,所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体,当在个用雌或雄体中,有多于2条X染色体时,在间期细胞内除一条外,其余均形成X-小体。     人类正常的男女体细胞中,22对常染色体并无区别,但其性染色体分别为XY和XX。女性的两条X染色体中,有一条在间期呈现浓缩状态,可由适当的染料显示。正常女性间期细胞中X小体阳性率约为30―50%。 二、仪器、用品及试剂     光学显微镜,恒温水浴箱;     牙签、载玻片、染色缸;     Carnoy固定液(甲醇∶冰乙酸=3∶l)70%乙醇,硫堇染液;     5N HCl,0.2%甲苯胺兰染液。 三、操作步骤     (一)方法一     l.取材、涂片:取女性口腔上皮细胞均匀涂布在洁净载玻片上。     2.固定:涂片后立即95%乙醇中固定30分钟(不可干燥)。气干。     3.染色:玻片在蒸馏水中冲洗几次后5N HCl(22℃)水解10分钟,蒸馏水洗去多余HCl,硫堇染色30分钟。水洗。     4.镜检、气干后即可镜检。若背景颜色过深可在75%乙醇、95%乙醇中分色后再镜检。     (二)方法二     l.取女性口腔上皮细胞涂片。待干燥。     2.Carnoy固定液中固定15分钟。干燥。     3.5N HCl中10分钟。水洗。干燥。     4.0.2%甲苯胺兰染色2―5分钟。水洗。气干。     5.镜检。 四、注意事项     l.涂片时应均匀涂成单层,取材细胞要多些。取材前应漱口。     2.镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的细胞观察,X-小体大小约为1μm,多位于细胞核边缘。     3.统计X-小体阳性率,计数应选300―500个细胞。 五、试剂     1.硫堇染液配方:     ①4%硫堇原液:4g硫堇粉末置研钵中以50%乙醇100ml研磨溶解。过滤。     ②Michaelies缓冲液:醋酸钠9.714g,巴比妥钠14.714g加双蒸水至500ml。     ③硫堇工作液(PH5.7):0.1N HCl 32ml                           Michaelies缓冲液28 ml                           4%硫堇原液400ml     2.甲苯胺兰染液配方:     0.2g甲苯胺兰粉末溶于100ml双蒸水中即可。


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