细胞染色制片方法
1、 取对数生长期细胞一个T75或T25瓶。 2、 将培养基换成10ml DMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培养基,处理1~2小时
1、 取对数生长期细胞一个T75或T25瓶。 2、 将培养基换成10ml DMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培养基,处理1~2小时。 3、 将细胞培养液倒掉,马上加入3~4ml 0.1%胰蛋白酶,并立即摇晃0.5~1min。当在显微镜下看到分裂相细胞脱壁后,马上加入终止液终止消化,并将分裂相细胞收集在一个15ml的离心管中,并在1200r/min离心4min。 4、 将上清液倒掉,剩余50ul左右的液在管中,并轻微震动,使细胞沉淀重新悬浮。 5、 加入10ml的低渗液(0.075M KCL),第一毫升要逐滴加入,并边加边摇晃。 6、 37℃水浴中低渗30min。 7、 再加入1ml冰冷的固定液(甲醇:乙酸=3:1 的混合液),并马上摇匀,离心,1000r/min、10min。 8、 同步骤4。 9、 加入10ml冰冷的固定液,第一毫升要逐滴加入,边加边摇晃。 10、 室温下固定30min,然后离心,1000r/min、10min。 11、 同步骤4。 12、 加入10ml冰冷的固定液,第一毫升要逐滴加入,边加边摇晃。 13、 室温下固定15min,然后离心,1000r/min、10min。 14、 重复步骤11~13一次。 15、 将离心后的上清液倒掉,并加入50~100ul的新鲜固定液重悬细胞。 16、 滴片(玻片要求是湿冷的干净的,滴片高度要大于30cm。玻片倾斜角度15~30度左右) 17、 镜检。