细胞传代是否一定要等24小时呢？

问：我养的是RAW264.7细胞，不知道为什么长得这么快？而且消化也很容易，好像和园子里其他养RAW细胞的很不一样。一般传代（1传2）后大概16－20个小时左右就能够长到90％，请问是应该一定等到24小时再传代，还是可以等长到90％（<24小时）如果没到24小时就传代的话，会对细胞状态有影响么？

答：很多试验中要求分盘后24h时再开始实验（如转染），除了让细胞充分贴壁，还有一个重要原因就是使细胞达到正常代谢水平。从你的描述来看，如果细胞贴壁还比较快的话，个人认为可以进行传代，若细胞密度过高达接触抑制，细胞比较容易老化。

还有建议最好传代时采用更低一些的稀释度（1:3或者更低）。 感觉1:2太高了，建议到ATCC上查找一下，会找到最佳的subcultivation ratio。以便保证细胞的最佳状态，不要舍不得扔细胞，subculture的时候把细胞全用上，你的细胞长得快，频繁的subculture，细胞不但不能优化还可能会发生变异。

问：请问1:2太高了是什么意思啊？是不是要1:3以上传代呢？因为如果传得太稀了，细胞长起来比较慢，可能有群集效应。所以一般每天传代，到底传代频繁是能够改善细胞状态还是像你所说得会造成变异呢？

答：刚帮你查下：RAW 264.7，Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:3 to 1:6 is recommended。Medium renewal: Replace or add medium every 2 to 3 days。所以说你1：2传太高了，是这个意思。建议加大传代比率，1：3或1：4传。反复传代劳命伤财，对细胞也有害，特别是细胞未到24h。细胞传代的比率要适当。细胞太少，生长慢，因细胞生长需相互间有信号传导。

细胞太多，也不好，因细胞太多会有“接触抑制”。我也从ATCC上看过这个，不过由于我们养的细胞不可能和他们的条件完全一样，所以对于传代就不可能完全按照它们说的。不过看来还是有一定的道理哦。现在觉得，其实1：3传代可能更适合现在的细胞生长速度，长得太快太慢了，细胞都挤的变圆了。细胞太少的时候会抑制它们的生长速度。

问：请教一下，为什么细胞太少的时候会抑制它们的生长速度呢？

答：细胞生长需要一定的辅因子，而这些不仅要求血清供给，还有细胞在培养过程中生成的，若细胞太少，会导致这类因子不足。有时候会在培养细胞时候，放一些伴生长细胞是这个原因，好像叫保姆细胞。我养的是骨肉瘤细胞，生长速度也很快。

我一般等长满了就传代，不是特别关注时间。你在传代分瓶的时候多分几瓶。但也不能太多，因为细胞太少的时候会抑制它们的生长速度。看是什么细胞了，如是生长比较旺盛的细胞，只要贴壁情况良好就可以传。我培养的是hela细胞。复苏后不到24小时的换液以后，过了-6小时就可以传代了。但是好像对其他多数细胞建议还是24小时后传。