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细胞技术

免疫酶标技术

2025-03-05 细胞技术 加入收藏
免疫酶标技术 1) 直接法1. 标本固定。2. PBS 洗涤 2 3 分钟。3. 1 % H2 O2 (或 1 % H2 O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室

免疫酶标技术

 

1)  直接法

1. 标本固定。

2. PBS 洗涤 2 × 3 分钟。

3. 1 % H2 O2 (或 1 % H2 O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温 10 ~ 20 分钟。

4. 正常血清( 1 : 10 )孵育,室温 20 分钟。

5. 滴加酶标记的抗体 37 ℃ 1 小时或 4 ℃过夜。

6. PBS 洗涤 3 × 3 分钟。

7. DAB + H2 O2 显色 5 ~ 10 分钟,镜下控制染色结果。 DAB + H2 O2 应用前 15 分钟配制。

8. 充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

 

 

2)  间接法

1. 标本固定。

2. PBS 洗涤 2 × 3 分钟。

3. 1 % H2 O2 (或 1 % H2 O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温 10 ~ 20 分钟。

4. 正常血清( 1 : 10 )孵育,室温 20 分钟。

5. 滴加第一抗体, 37 ℃ 1 小时或 4 ℃过夜。

6. PBS 洗涤 3 × 3 分钟。

7. 滴加酶标二抗,室温 1 小时。

8. PBS 洗涤 3 × 3 分钟。

9. 0.04 % DAB + 0.03 % H2 O2 显色 5 ~ 10 分钟。

10.  充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

 

 

3)  PAP 法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)

1. 标定固定后, PBS 洗涤。

2. 1 % H2 O2 (或 1 % H2 O2 甲醇)阻断内源性过氧化物,室温 10 ~ 20 分钟。

3. PBS 洗涤 2 × 3 分钟。

4. 正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温 20 分钟。

5. 滴加一抗,室温 1 小时或 4 ℃过夜。

6. PBS 洗涤 3 × 3 分钟。

7. 滴加二抗,室温 30 分钟。

8. PBS 洗涤 3 × 3 分钟。

9. 加 PAP 复合物,室温 60 分钟。

10.  PBS 洗涤 3 × 3 分钟。

11.  0.04 % DAB + 0.03 % H2 O2 显色 5 ~ 10 分钟。

12.  充分水洗。

13.  苏木精复染,封片观察。

 

 

4)  双 PAP 

1 ~ 10 同单 PAP 法。

11.  二次加酶标二抗。

12.  PBS 洗。

13.  二次加 PAP 。

14.  PBS 洗。

15.  0.04 % DAB + 0.03 % H2 O2 显色 5 ~ 10 分钟。

16.  苏木精复染核,封片,镜检。

 

 

5)  ABC 法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法)

1 ~ 8 同 PAP 法

9) 加 ABC 液,室温 60 分钟。

10)  PBS 洗。

11)  0.04 % DAB + 0.03 % H2 O2 显色 5 ~ 10 分钟。

12)  充分水洗。

13)  苏木精复染核,封片,镜检。


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