乳鼠心肌细胞的微血管内皮细胞培养

选用DMEM高糖培养基。 1.取5-7天大鼠心脏，用PBS洗净血液 2.用75%乙醇浸泡30s 3.用PBS冲洗后，剪碎，用适量0.5%胶原酶在37度摇摆水浴中消化30min，加入适量0.02%胰蛋白酶，用吸管轻轻吹打，37度水浴中消化30min。 4.分离下的细胞过200目筛网，过滤液用20%小牛血清DMEM培养基混悬离心（1000转/min，5min），未过网的弃之。 5.所得细胞悬于20%小牛血清DMEM培养基，并调整细胞浓度到104-105/ml，接种于0.2%明胶预处理的培养瓶中37度培养4小时，以去除未黏附细胞，更换含50mg/L肝素、10mg/L内皮细胞生长因子的DMEM完全培养基培养。 6.每3-4天换液一次，直至长成细胞单层，选3-4代传代内皮细胞，0.25%胰蛋白酶消化备用。