细胞株HLA-A*02检测方法

方法1、抗体测定：研究对象取200μl新鲜抗凝全血，每管100μl加入流式细胞仪检测管中，再加入2ml红细胞裂解液反应12min后离心，弃上清液，磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)洗细胞两次，其中反应管加入鼠抗人HLA-A*02抗体××μl（达科为公司），4℃ 30min孵育后，PBS再次洗细胞，每管加入PE标记羊抗鼠免疫球蛋白2μl，4℃、30min孵育后，PBS洗涤，FACS固定液200μl加入每管，4℃保存用于流式细胞仪检测。 方法2、特异性的PCR引物（北京戴诺生物技术有限公司，电话：010-67806708转204）进行PCR(PCR-SSP)应该也可以进行测定，比较简单些，以下为参考： 引物： 上游引物：5’-CCT CGT CCC CAG GCT CT-3’ 下游引物：5’-CCC CTG GTA CCC GT-3’ 产物长度：813bp 扩增体系：10×buffer, 5ul DNA：5ul(500ng) DNTP：5ul(2nM) 引物：4ul Taq：2ul ddH2O：29ul 步骤：95℃(1min)－5℃(1min)－72℃(2min)×5－95℃(1min)－55℃(1min)－72℃(2min)×25