按细胞比重分离B细胞

按细胞比重分离B细胞

1.将2～3ml含3×107纯化的B细胞（B细胞>90％）的细胞悬液加到3ml Percoll溶液（比重1.074）上，水平离心1000×g 20分钟。

2.吸去无细胞上清液，交界面的低密度B细胞和大部分Percoll溶液。由于此时细胞沉淀非常松散，需留下约0.2ml Percoll溶液以防吸去了沉淀细胞。轻敲离心管，用留下的液体悬浮高密度B细胞。

3.用洗涤液分别洗涤低密度B细胞和高密度B细胞两次，每次离心500×g 10分钟。最后，测定细胞数和细胞活力，用1～2ml含5％小牛血清的洗涤液将细胞配成适当浓度。