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细胞技术

用尼龙毛法分离B细胞实验

2025-03-06 细胞技术 加入收藏
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1)尼龙毛柱的制备 1.取直接3D,长度约10cm的尼龙毛,用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl,置37℃烘干备用。 2.称取50mg尼龙毛,均匀分散,置Hanks液中浸泡。取1ml注射器,出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中,排净空气,柱高约5~6cm。此柱可分离约2×107细胞。将柱置-20℃可保存2~3个月。 2)分离细胞 1.取分离的单个核细胞,用细胞培养 液将细胞配成2×107/0.5ml。 2.融化尼龙毛柱,以每分钟5~7滴的速度放出Hanks液,并用5ml预温至37℃的细胞培养液洗涤尼龙毛柱。小心将细胞悬液加入尼龙毛柱中,待细胞悬液全部进入尼龙毛柱后,立即加0.2ml细胞培养液,夹住塑料管。 3.在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中静置1小时。用5ml预温至37℃的细胞培养液洗脱细胞。洗脱液中含有纯的T细胞。再用5ml预温至37℃的细胞培养液洗涤尼龙毛柱,洗净不粘附的细胞。 4.加入0.5ml细胞培养液,夹住塑料管,将尼龙毛柱置冰箱中冷却。用4℃预冷的细胞培养液分3~4次洗脱尼龙毛柱,每次0.5ml。可先夹住塑料管,用玻璃棒或金属丝反复挤压尼龙毛以利粘附细胞脱落,然后再洗脱。洗脱液中含有大量B细胞。离心1000×g 10分钟,去上清液,用细胞培养液同样洗涤细胞1次。计数细胞,用细胞培养液将细胞配成适当浓度。


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