脂肪酸的β-氧化

一、实验目的 （1）了解脂肪酸的β-氧化； （2）通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定β-氧化的方法及原理。 二、实验原理 根据β―氧化学说，机体组织能将脂肪酸氧化生成乙酰辅酶A。两分子乙酰辅酶A可再缩合成乙酰乙酸。在肝脏内，乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β- 羟丁酸。乙酰乙酸、β- 羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的中间产物。在正常情况下，其产量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。 本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮可用碘仿反应测定。在碱性的条件下，丙酮与碘生成碘仿。反应式如下： 2NaOH+I2 →NaIO+NaI+H2 O CH3 COCH3 +3NaOI→CHI3 +CH3 COONa+2NaOH                             碘仿                剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠滴定。 NaOI+NaI+2HCl→I2 +2NaCI+H2 O   I2 +2Na2 S2 O3 →Na2 S4 O6 +2NaI 根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。 三、试剂与器材 恒温水浴、微量滴定装置、解剖用具、玻璃器皿等。 Locke氏溶液、0.1mol/L碘溶液、pH7.6,mol/L的磷酸缓冲液、 0.2mol/L丁酸溶液、15%三氯乙酸溶液、10%氢氧化钠溶液、10%盐酸溶液。 四、操作方法 处死动物→制备肝糜→丁酸氧化反应→碘仿反应→碘滴定 五、关键步骤与注意事项 ① 用新鲜肝糜进行实验，确保肝内酶活力。 ② 注意滴定终点的控制，保证实验的准确度。