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细胞技术

致癌化学物转化细胞:转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验

2025-03-07 细胞技术 加入收藏
1.取材:妊娠后第13天取材,取数个同窝胚胎,去头和内脏,在无菌条件下剪碎至米粒大小,再用0.25%胰 蛋白酶 (含0.01%EDTA)37℃消化30分钟,滤过

1.取材:妊娠后第13天取材,取数个同窝胚胎,去头和内脏,在无菌条件下剪碎至米粒大小,再用0.25%胰 蛋白酶 (含0.01%EDTA)37℃消化30分钟,滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入75cm/培养瓶中,接种密度10~20×106/75cm,37℃培养2~3天,在顺利情况下能迅速长满瓶面。 2.贮存:选大批生长状态良好的细胞冻存,储以备用。 3.致癌物处理:取冻存细胞,解冻,接种于25ml培养瓶中,每瓶含细胞10万~30万。待细胞生长进入指数增生期时,向培养瓶中加入致癌剂MNNG。致癌剂量1~3微克/毫升营养液。在37℃温箱中培养12~48小时。 4.低 血清 培养:弃掉MNNG作用液,用温PBS洗1~3次,加入含20%小牛 血清 ,继续置温箱中培养2~3周,然后改用含5%血清培养液培养。低血清培养液不利于正常细胞生长,但已转化的细胞仍能增殖和形成转化灶。 5.转化灶形成和分离:在成功情况下,用致癌物处理过的细胞于10天后在正常细胞之间,可产生数量不等的转化灶。

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