正常视网膜米勒细胞原代培养

实验材料：

1. 材料来源：人眼、兔眼或者猪眼等；

2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；

3. 消化液：0.25%胰蛋白酶-100IU/ml透明质酸酶混合消化液；

4. 消毒无菌的手术器械若干。

实验方法：

一、取材

1. 取自人的供体眼球；

① 经常规消毒程序消毒后，于锯齿缘后约1mm处环形切开眼球，去除前段及玻璃体；

② 用无齿小镊子轻轻剥取视网膜组织，并用眼科小剪子剪去视乳头周围的视网膜及血管；

③ 用PBS液稍洗，去除黏附的色素上皮细胞。置于盛有平衡盐溶液的培养皿中；

2. 取自兔的供体眼球：当取出视网膜组织后，在解剖显微镜下用眼科小剪刀剪去髓放线部分及血管。

二、原代培养

1. 在处理完毕的视网膜组织中加入胰蛋白酶和透明质酸酶混合消化液，于37℃调间隙消化30min；

2. 用有血清培养液终止消化。经吹打后，将细胞悬液离心（800r/min）5min；

3. 用培养液重新悬浮细胞，并吸走絮状的纤维样物质；

4. 按4×104 ～6×104 个细胞/ml的密度进行接种；

5. 以常规方法培养。24h后取出培养瓶，置换培养液，以去除没有贴壁的其它细胞；

6. 每周换液2次，在细胞分裂增长至基本融合成单层时传代。