染色体制备体会

1、 培养基PH浓度、小牛血清量及培养箱温度的恒定是培养成功关键； 　　2、秋水仙素适量、适宜的处理时机和时间，是获得良好、足够分裂相的条件。分裂相的多少和染色体形态及带型处理良好与否均受其影响。 　　3、低渗处理是获得分散良好的分裂相关键步骤，低渗过度或不足都会造成染色体形态不良的结果。在低渗处理时期细胞十分娇嫩，并且表面发粘，低渗细胞混匀时，吹打要适宜，避免细胞破碎及粘团，另外不要将细胞吸到吸管上部及 离心管 上部，避免细胞丢失。 　　4、固定技术是制备良好分散的染色体的重要步骤。若染色体分数不良，可适当加大冰乙酸含量，其同时有改善由于低渗处理不够或固定不充分所造成的缺陷，但过量会造成染色体形态变化和影响分带结局。染色体形态不良与固定液速度有关，加第1次固定液过快或打过快，可造成飘带样染色体； 5、固定液每次使用必须新鲜配制，否则将会形成酯类，从而影响固定效果。6、滴片是染色体制备中影响染色体形态的关键一步。首先要载玻片要非常干净，否则会影响染色体的分散和分带效果。其次是滴片的距离、滴加量多少、制片的方式都会影响染色体分期效果。 7、烤片：是染色体制备中最后一步技术。烤片的温度、时间与染色体形态和分带有关。不宜温度过高和烤片时间过长。 十四、染色体实验技术分析 　　染色体分裂指数低：患者处于非常时期（感染期、放、化疗期）： 　　　　　　　　　　　培养基营养成份不良； 　　　　　　　　　　　培养基PH偏低或偏高； 　　　　　　　　　　　PHA过量或不足； 　　　　　　　　　　　小牛血清质量不高； 　　　　　　　　　　　小牛血清数量偏低或过高； 　　　　　　　　　　　培养温度不稳定； 　　　　　　　　　　　培养箱温度偏低； 　　　　　　　　　　　秋水仙素处理时间过短； 　　　　　　　　　　　离心时间或速度不足； 　　　　　　　　　　　制备过程损失过大。 　　染色体形态不理想：受检者处于非常时期； 　　　　　　　　　　　PHA过量； 　　　　　　　　　　　小牛血清质量不高； 　　　　　　　　　　　培养箱温度不恒温； 　　　　　　　　　　　秋水仙素量不当； 　　　　　　　　　　　低渗时间不理想； 　　　　　　　　　　　低渗温度过高； 　　　　　　　　　　　离心速度过高； 　　　 　　　　　　　 固定液加速过快； 　　　　　　　　　　　固定混匀手法过重； 　　　　　　　　　　　吹片技术不良。