植物钙调磷酸酶（CaN）酶联免疫分析（ELISA）

植物 钙调磷酸酶（CaN ） 酶联免疫 分析（ ELISA ）

试剂 盒使用说明书

本试剂仅供研究使用          目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中 钙调磷酸酶（CaN） 含量。

实验原理 ：

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 植物 钙调磷酸酶（CaN ） 水平。用纯化的 植物 钙调磷酸酶（CaN ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 钙调磷酸酶（CaN ） 抗原 ，再与HRP 标记的 钙调磷酸酶（CaN ） 抗体结合，形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 钙调磷酸酶（CaN ） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 植物 钙调磷酸酶（CaN ） 抗原 浓度。

试剂盒组成 ：

标本要求：  

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但 应 避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步骤：

1.  标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品 100 μ l，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50 μ l，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取 100 μ l分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50 μ l弃掉，再各取 50 μ l分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50 μ l分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀后从第七、第八孔中分别取 50 μ l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50 μ l，混匀后从第九第十孔中各取 50 μ l弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50 μ l，浓度分别为 18 U/L  ，12 U/L ，6 U/L ，3 U/L ，1.5 U/L）。