免疫组织化学切片防脱片处理步骤

防脱片处理步骤

《一》载玻片和盖玻片的处理

将载玻片或培养用的小盖片浸泡在重铬酸钾浓硫酸清洁液中24小时，然后流水充分冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍以上，而后置95％乙醇中12小时。取出擦干或烤干，贮放于玻片盒内备用。盖玻片很薄，以上处理程序必须缩短时间，清洁液浸泡只需2小时，流水冲洗注意勿损伤玻片。

《二》黏附剂的使用

1．多聚左旋赖氨酸(poly-1―lysine) 首先配制0．1％(ω/υ)多聚左旋赖氨酸浓缩液，室温下(18～26℃)可保存1年。使用时．将试剂10倍稀释成工作液，浓度为0．01％(ω/υ)，2―8℃冰箱保存，有效期3个月。

使用方法是将充分洗净和预先干燥的玻片浸泡于稀释后的多聚左旋赖氨酸溶液数十秒或提拉十次，沥干．于室温下晾干12―24小时或在45℃以下烤箱内烘干。处理后的玻片避光干燥可长期保存。

2．3―氨丙基―乙氧基甲硅烷(3―amino propyltriethoxy silane，APES) APES必须现用现配。用此方法黏合的玻片应垂直烤片而不能水平烤片，否则，组织片中易出现气泡。APES的使用方法：用丙酮50倍稀释(APESl份、丙酮49份混合)，将洗净的玻片放人稀释好的APES中，停留20～30秒，取出稍停，再人纯丙酮或蒸馏水中涮去未结合的APES。置通风橱中晾干即可。注意用APES防脱片处理的载玻片捞片时组织应一步到位．并尽量减少气泡存在，以免影响染色结果。注意不要将APES与其他防脱片剂混合使用。

多聚左旋赖氨酸为目前免疫组织化学染色中最常用的防脱片剂，适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。如效果不佳，可用双重处理(APES和poly-l-lysine)的切片。在以上两种方法均无效的情况下，可用如下方法：切片在脱蜡前放在APES l：50丙酮溶液中浸泡3分钟，晾干后即可进行下一步骤。

《三》免疫组织化学染色中常见脱片原因

1．组织固定、脱水、透明不充分。

2．组织切片过厚。

3．组织切片有折叠。

4．过度的热抗原修复(高压、微波、水煮)处理或抗原修复液的pH偏高。

5．操作过程中，冲洗方法不正确等。