琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物

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一．原理 DNA片断的分离与回收是基因工程 操作中的一项重要技术，例如可收集特定酶切片断 用于克隆或制备探针，回收PCR 产物用于再次鉴定等。回收实验中两个最重要的技术指标是 纯度和回收率：前者未达标时会严重影响以后的酶切、连接、标记等酶参与的反应；后者不 理想时往往会大大增加前期的工作量。 本实验采用的是V-GENE公司的DNA凝胶回收试剂盒，其原理是：在凝胶融化液（Buffer DE-A）中凝胶块被迅速融化并释放出DNA。加入高离液序列溶液（Buffer DE-B）后DNA片 断被选择性吸附到silica膜上。经Buffer W1、Buffer W2洗涤去除残留在silica膜上的杂质和高 浓度盐离子后，吸附到silica膜上的DNA片断经微量水或Eluent洗脱下来，即可用于各种分子 生物学实验。

二．材料与方法 1 材料 PCR产物（未经纯化） 2 仪器、用具 电泳仪、电泳槽、凝胶样品梳、微波炉、台式离心机、移液器、恒温孵育器（55-65℃）、 1.5ml 离心管 3 试剂 1×TAE电泳缓冲液；溴化乙锭溶液（EB）