编码 DNA 结合蛋白的 cDNA 克隆的检测、纯化和鉴定-用盐酸胍进行干燥膜的变性/复性循环

材料与仪器

HEPES结合缓冲液

步骤

1) 按基本方案步骤1〜15进行。

2) 将平皿在4℃冷却10 min。用针扎孔标记各膜的位置。小心地揭起膜，室温下在空气中瞭干15 min。

3) 将膜浸于HEPES结合缓冲液/6 mol/L盐酸狐中，4℃轻轻摇动温育10 min。在新 鲜的HEPES结合缓冲液/6 mol/L盐酸胍中重复1次。

4) 将膜浸于HEPES结合缓冲液/3 mol/L盐酸胍（每10张膜50 mL)中，4℃ 5 min。 重复4次。每次用HEPES缓冲液及浓度较前次减半的盐酸胍进行漂洗。

5) 将膜浸于HEPES缓冲液（50 mL/10张膜）中，4℃ 5 min。用新鲜缓冲液重复洗1次。

6) 在BLOTTO中温育封闭。

7) 进行滤膜筛选。