银染操作规程

相关专题   实验目的：检测聚丙烯酰胺 凝胶中的蛋白质。 实验原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。 试剂：乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA .Na2.2H2O、甲醛 实验操作程序： 固定：30min或者更长时间 100ml 乙醇 40% 乙醇 25ml冰醋酸 10% 冰醋酸 加水到250ml 致敏：30min 75ml 乙醇 30% 乙醇 17g 乙酸钠 28.2g 三水乙酸钠 0.5g硫代硫酸钠 加水到终体积250ml 水洗：3 x 10min 银染：20min 0.625g AgNO3 100 ul 37%甲醛 加水到终体积250ml 水洗： 2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色) 显色：视情况而定 6.25 g Na2CO3 50 ul 37% 甲醛 加水到终体积250ml 终止：10min 3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸 加水到终体积250ml 保存：1% 冰醋酸，4 ℃ 注意事项： 1．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。 2．甲醛在使用前加入。 3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。 4． 显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。