细菌感受态的制备和质粒的转化

实验目的 通过实验学会感受态细胞的制备方法和DNA转化的最基本操作，以及如何提高转化效率的思路。本实验综合因素较多，难度较大，是分子生物学中的一个很关键的实验手段。 实验原理 转化是指某一细胞系由于接受了外源DNA，而导致其原来的遗传性状发生改变，这种遗传性状包括遗传型和表型的改变。 感受态是受体菌能接受外源DNA能力的一种生理状态。用CaCl2处理细菌，改变细胞膜的结构，使质粒DNA能够穿过细菌细胞膜进入细胞。然后在选择性培养基中培养转化处理过的细菌，转化成功的细菌可以在选择性培养基上生长形成菌落。 本实验采用质粒pUC118转化大肠杆菌DH-5a，通过氨苄青霉素抗性筛选转化子。 图1-1　　质粒pUC118/pUC119图谱 实验材料和试剂 （一）实验材料 大肠杆菌DH-5a 质粒pUC118（ampicillin，AmpR） （二）培养基和试剂 1. LB液体培养基(%) 胰蛋白胨（Tryptone） 0.5 酵母浸出粉（Yeast extract） 1.0 NaCl 0.5 pH 7.2～7.4（用2mol/L NaOH调节） （分装：20ml/250ml三角瓶，每组2瓶。3ml/试管，每组2管。0.07Mpa高压灭菌30分钟）。 2. LB固体培养基 LB液体培养基加入1.6%的琼脂粉即可。 （分装：50ml/250ml三角瓶，加入0.8克琼脂粉，每组1瓶。0.07Mpa高压灭菌30分钟）。 3. 抗生素：氨苄青霉素（ampicillin,，Amp），配制成100mg/ml备用。 4. 0.1mol/L CaCl2溶液 (配制方法：称取1.1克无水CaCl2，溶于90ml蒸馏水中，定容至100ml，装于250ml三角瓶中，0.07Mpa高压灭菌30分钟，4℃保存。）