如果兽药使用不当或未经过规定的休药期，会导致动物性食品中的兽药残留过量，随着人类对动物性食品消费量的增大，食品兽药残留问题日益严重。兽药残留对人类健康的危害与不同的药物种类和药物残留水平均有关联。

HPLC-MS/MS法

材料与仪器

动物肝脏肾脏肌肉鸡蛋牛奶乙腈氢氧化钠磷酸缓冲液鸡心瓶旋转蒸发器比色管漩涡混匀器离心管

步骤

1.提取

动物肝脏、肾脏、肌肉组织：称取5.0 g己粉碎样品于50 mL离心管中，加入15 mL乙腈-水（15+2），均质提取30 s，4000 r/min离心5 min，清液转移至50 mL比色管中；另取一离心管，加入10 mL乙腈-水（15+2），洗涤均质器刀头10 s；用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混匀器上振荡1 min，4000 r/min离心5 min（离心机温度20℃），上清液合并至50 mL比色管中，重复用10 mL乙腈-水（15+2）洗涤刀头和提取一次，合并定容至40 mL，取20 mL至100 mL鸡心瓶中。

鸡蛋：称取10.0 g样品于50 mL离心管中，加入15 mL乙腈-水（15+2），均质提取30 s，4000 r/min离心5 min，清液转移至50 mL比色管中；另取一离心管，加入10 mL乙腈-水（15+2），洗涤均质器刀头10 s；用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混匀器上振荡1 min，4000 r/min离心5 min（离心机温度20℃），上清液合并至50 mL比色管中，重复用10 mL乙腈-水（15+2）洗涤刀头和提取一次，合并定容至40 mL，取20 mL至100 mL鸡心瓶中。

牛奶：称取10.0 g样品于50 mL离心管中，加入20.0 mL乙腈，均质提取30 s，4000 r/min离心5 min，上清液转移至50 mL比色管中；另取一离心管，加入10 mL乙腈-水（15+2），洗涤均质器刀头10 s；用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混匀器上振荡1 min，4000 r/min离心5 min（离心机温度20℃），上清液合并至50 mL比色管中，重复用10 mL乙腈-水（15+2）洗涤刀头和提取一次，合并定容至50 mL，取25 mL至100 mL鸡心瓶中。

鸡心瓶置于旋转蒸发器上（37℃水浴）蒸发至除去乙腈（易起沫样品可加入4 mL饱和氯化钠溶液）。

2.净化

立即向己除去乙腈的鸡心瓶中加入25 mL磷酸盐缓冲溶液（pH为8.5），涡旋混匀1 min，用0.1 mol/L氢氧化钠调节pH值为8.5，以1 mL/min的速度通过经过预处理的固相萃取柱，先用2 mL磷酸盐缓冲溶液淋洗2次，再用1 mL超纯水淋洗。用3 mL乙腈洗脱（速度控制在1 mL/min）。将洗脱液于45℃下氮气吹干，用25 mmol/L磷酸盐缓冲溶液（pH为7.0）定容至1 mL。过0.45 um滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定。

3.测定条件

色谱柱：COSMOSILC18柱，250 mm×4.6 mm，粒度5 um；

流动相：B组分是乙腈，A组分是0.01 mol/L乙酸铵（甲酸调pH至4.5），梯度洗脱；

流速：1.0 mL/min；

柱温：40℃；

进样量：10 uL。