「彗星」实验带你去看流星雨

实验原理

「彗星」实验又称单细胞凝胶电泳实验，是一种通过检测 DNA 链损伤来判别遗传毒性的技术。它能有效地检测并定量分析细胞中 DNA 单、双链缺口损伤的程度。

当各种内源性和外源性 DNA 损伤因子诱发细胞 DNA 链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA 以及其他成分均扩散到电解液中，而核 DNA 由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。

在中性条件下，DNA 片段可进入凝胶发生迁移，而在碱性电解质的作用下，DNA 发生解螺旋，损伤的 DNA 断链及片段被释放出来。在电泳过程中，这些 DNA 断链及片段带会离开核 DNA 向正极迁移形成「彗星」状图像，而未受损伤的 DNA 部分保持球形。

DNA 受损越严重，产生的断链和断片越多，长度也越大，在相同的电泳条件下迁移的 DNA 量就愈多，迁移的距离就愈长。

通过测定 DNA 迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞 DNA 损伤程度，从而确定受试物的作用剂量与 DNA 损伤效应的关系。该法检测低浓度遗传毒物具有高灵敏性，研究的细胞不需处于有丝分裂期。同时，这种技术只需要少量细胞。

实验材料

1. 研究用细胞或组织；

2. 检测的指标；

3. 请客户提供 DNA 受损详细相关信息或相关文献。

单细胞凝胶电泳实验流程

1. 细胞接种：单细胞凝胶电泳实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行单细胞凝胶电泳实验当天细胞密度应达到 60%～80% 覆盖；

2. DNA 损伤处理；

3. 收集细胞，制备单细胞悬液；

4. 制备胶板；

5. 细胞裂解与电泳；

6. 中和与染色；

7. 荧光显微镜拍照，记录实验结果。

最终结果

1. 阴性对照结果；

2. 具体试验流程 (包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明 (含仪器厂家、型号；试剂厂家、批号))；

3. 原始实验图片及数据。

相关要求

1. 生长状况良好的细胞株，细胞特性，培养条件及相关注意事项；公司可负责代购；

2. 诱导细胞 DNA 损伤所需试剂、条件等相关背景资料；

交付结果

1. 具体实验报告（包括实验步骤和主要仪器及试剂说明）；

2. 实验组和对照组单细胞凝胶电泳图。