电泳技术及其应用

一：电泳（Electrophoresis）：带电粒子在直流电场中向着所带电性相反的电极移动的现象。 电泳分析技术：利用电泳现象进行物质分离的技术。 二：影响电泳的因素： 1． 带电粒子的带电状态（电量和电性）。 2． 带电粒子的分子量大小和分子形状。 3． 电场强度。 4． 缓冲液的PH 值，组成成分及离子强度。 5． 支持介质的吸附和电渗作用。 三：蛋白质电泳的机理 1． 蛋白质是两性电解质： 当 PH=PI 时，所带净电荷为零；当 PH>PI 时，所带净电荷为负；当 PH<PI 时，所带净电荷为正；当 PH 距离PI 越远时，所带电量越多。 2． 不同蛋白质等电点不同，在同一缓冲液中所带电性及电量不同，电泳时迁移的方向和速率不同。 3． 不同蛋白质分子量大小和分子形状不同，故迁移率不同。 四：实验：血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 （一） 原理： 1． 人血清蛋白质的分类，等电点，分子量及迁移率： 2． 在PH8.6 的缓冲液中均带负电，泳向正极。 3． 染色漂洗后，可见5 条带（定性）。 4．洗脱比色后可定量（今天不做）。 （二） 器材和 试剂 ： 1． 电泳仪 2. 电泳槽 3. 载波片，点样器，镊子 4. 染缸 5. 醋纤膜 6. 巴比妥缓冲液 7. 氨基黑染液 8. 漂洗液 （三） 操作： 1． 准备： 1） 将缓冲液倒于电泳槽中（每池约500ml）。 2） 将醋纤膜浸泡在缓冲液中20min。 3） 每人取一张醋纤膜（用镊子夹取），用滤纸吸干水分，找到粗糙面，在距一端2cm 处划点样线，用铅笔或圆珠笔写上学号。 2． 加样：用加样器加样；取样要适量、均匀（点样器下端均匀沾有一层 血清 即可）；点样于划线处，点样 时用力要均匀，只能点一次。 3． 上桥：粗糙面向下，点样端位于负极。纱布搭桥。 4． 平衡：盖上盖子，静置5min。 5． 电泳：120V，电泳45min（电泳使不得用手触摸电泳槽内任何物品，以防触电）。 6． 染色和漂洗：染色5min；初漂、次漂各2min：用镊 子夹拄醋纤膜轻轻摇动，或轻轻晃动染缸。 7． 定量：剪下各条带，洗脱，比色。（不做） （四） 结果：参见原理。 （五） 临床意义： 1． 白蛋白降低： 1） 合成能力不足：肝功能下降。 2） 合成原料不足：饥饿，腹泻，肿瘤晚期。 3） 去路增加：肾病综合症，严重烧伤，大出血等。 4） 消耗过多：糖尿病，甲亢等 2． 球蛋白增加：感染，多发性骨髓瘤，自身免疫性疾病等。 3． 球蛋白降低：皮质功能亢进，免疫缺陷病。 4． 肝病时：A ,α2-G ,β- G ,α1- G , γ- G A/G下降甚至倒置。 5． 肾病时： 1） 早期：选择性蛋白尿：分子量较小的蛋白质丢失，含量下降。如白蛋白。 2） 后期：非选择性蛋白尿：除分子量较小的蛋白质丢失，含量下降外，分子量较大的蛋白质（如γ- 球蛋白）也丢失，含量也下降。

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