DNA电泳常见问题分析

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问题

原因

解决办法

DNA 带模糊

1) DNA降解

避免核酸酶污染

2) 电泳缓冲液陈旧

电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液

3) 所用电泳条件不合适

电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力

4) DNA上样量过多

减少凝胶中DNA上样量

5) DNA样含盐过高

电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐

6) 有蛋白污染

电泳前酚抽提去除蛋白

7) DNA变性

电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA

不规则 DNA 带迁移

1) 对于λ/Hin d III片段cos 位点复性

电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟

2) 电泳条件不合适

电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液

3) DNA变性

以20mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热

带弱或无 DNA 带

1) DNA的上样量不够

增加DNA的上样量；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂 糖电泳灵敏度稍高，上样量可适当降低

2) DNA降解

避免DNA的核酸酶污染

3) DNA走出凝胶

缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度

4) 对于EB染色的DNA，所用光源不合适

应用短波长（254nm）的紫外光源

DNA 带缺失

1) 小DNA带走出凝胶

缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度

2) 分子 大小相近的DNA带不易分辨

增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度

3) DNA 变性

电泳前请勿高温加热DNA链，以20mM NaCl Buffer稀释DNA

4) DNA链巨大，常规凝胶电泳 不合适

在脉冲凝胶电泳上分析