Folin-酚试剂配制

试剂

试剂甲：A液：Na2CO3 10.00gNaOH 2.00g酒石酸钾钠（或钾盐钠盐） 0.25g混合、溶于500ml蒸馏水中。

B液：CuSO4·5H2O 0.5gH2O 100.00ml用前将A液50份与B液1份混合即为试剂甲。

试剂乙：于磨口回流瓶加入下列试剂Na2WO4·2H2O 100.00gNaMoO4·2H2O 25.00gH2O 700.00ml85％H3PO4 50.00ml浓HCl 100.00ml按上回流冷凝管以小火回流10h后再加：硫酸锂 150.00gH2O 50.00ml溴水 数滴开口继续沸腾15min，驱除过量的溴，冷却后溶液呈黄色微带绿色（如仍呈绿色，须重复滴加液体溴步骤）。稀释至1L，过滤，滤液置于棕色瓶保存。使用时用标准NaOH液滴定，以酚酞为指示剂，然后适当稀释（加水约1倍）使最终浓度为1mol/L。

另外，如果money没有问题的话，可以直接买Sigma公司的Folin-酚试剂，有点贵。

标准曲线的制备⑴ 取标准牛血清白蛋白2.50mg，溶于10ml蒸馏水中，使成250μg/ml。

⑵ 按表8-2稀释。

表8-2 标准曲线稀释方法成分 试 管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 牛血清白蛋白标准品（ml） 0 0.2 0.2 0.4 0.1 0.6 0.6 0.8 0.8 1.0 1.0 生理盐水（ml） 1.0 0.8 0.8 0.6 0.6 0.4 0.4 0.2 0.2 0 0 蛋白含量(μg／ml) 0 50 50 100 100 150 150 200 200 250 250

⑶ 每管加试剂甲5ml，混合后室温放置10min，再加0.50ml试剂乙（即Folin酚试剂），立即摇匀（否则显色降低）。

⑷ 30min后测OD650nm。

⑸ 以OD为纵坐标，蛋白含量为横坐标，绘制标准曲线。

样品测定⑴ 待测样品1ml（适当稀释至约含25μg－250μg/ml）。

⑵ 加试剂甲、乙。

⑶ 比色、测OD650值。

⑷ 查标准曲线，求蛋白含量乘以稀释倍数，即为样品的蛋白含量。