用CTAB-PVP法提取棉花各组织总RNA的研究

中国农业大学学报 刘洋 　　 CTAB是一种强变性剂，变性效果优于 SDS ，能够有效除去蛋白(含复合蛋白)等杂质。此外，与常规的CTAB法比较，本方法还有如下改进： 1) 在提取液中加入较高质量浓度的PVP。这不仅能有效地去除棉花组织中的酚类物质和多糖，还能去除一些其他色素物质和脂类，提高RNA的完整性和纯度。 2) 在提取液中加入β-巯基乙醇。棉花中含有大量的酚类物质，在细胞破碎时其自动氧化而与RNA不可逆地结合，从而影响RNA的产率和纯度，这也是棉花RNA难以提取的重要原因。在提取液中加入β-巯基乙醇，这不仅避免了酚类物质的氧化，还提高了RNA的产率和纯度。 3) 在用苯酚：氯仿抽提时，使用低pH的苯酚( pH 4.0 )。苯酚在低pH的情况下能促进水相中的蛋白和DNA向有机相分配，从而最大限度的除去总RNA中的蛋白和DNA。 4) 用LiCl选择性的沉淀RNA。这可以充分除去RNA中的DNA污染。如果必要，可以进行2次LiC1沉淀，但是，最后一步必须用70％(体积分数) 乙醇洗涤2次，避免RNA中因含有LiCl而影响反转录的效果。