RNA提取常见问题分析

◆ 柱子堵塞： 1. 裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量，增加裂解液用量，增加匀浆和裂解 时间。 2. 处理样品太多。 ◆ 得率低： 1. 裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量，增加裂解液用量，增加匀浆和裂解 时间。 2. 处理样品太多。请参考最大处理量。 3. RNA仍在柱上未洗出。再次洗脱，加入RNase-Free 水后，放置几分钟离心。 4. 洗出液中有酒精。漂洗后应再次离心，尽量去除漂洗液。 5. 未除净 细胞培养 液。收集细胞时，请注意尽量去除培养液。 6. 使用RNAstore保存的细胞:未有效离心。RNAlater密度大于一般的 细胞培养 液，离心时应加大离心力，可以3000×g离心。 ◆ A260/A280比值低： 洗脱时不使用RNase-Free 水，使用10 mM Tris.Hcl, pH 8.5作为洗脱液。 ◆ RNA降解： 1. 提取的材料不新鲜。新鲜组织取得后应立即置于液氮中或立即放入RNAstore试 剂中，以保证提取效果。 2. 处理样品量过大。 3. 污染了RNase。 虽然 试剂 盒中提供的缓冲液都不含RNase，但使用过程中很 容易污染RNase，应小心操作。 ◆ DNA污染： 1. 处理样品量过大。 2. 有些样品本身DNA含量即较高，可使用DNase处理。得到的RNA溶液可加入 DNase处理，处理后直接用于后续实验，也可用本 试剂 盒再进行一次纯化。