慢病毒的浓缩与纯化

方法一 超速离心沉淀法

1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。

2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。

3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。

4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。

5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。

6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。

7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。

8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。

9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。

10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。

11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。

12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。

13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。

方法二 PEG-8000浓缩法

1. 5X PEG8000+NaCl配制 称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中；121摄氏度 30min 湿热灭绝 30min；保存在4℃。

2. 使用0.45μm滤头过滤慢病毒上清液；

3. 每30ml过滤后的病毒初始液，加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml；

4. 每20～30min混合一次，共进行3-5次；

5. 4度放置过夜；

6. 4度，4000 g，离心 20min；

7. 吸弃上清，静置管子1～2分钟，吸走残余液体；

8. 加入适量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀；

9. 集中后的病毒悬液分装成50 μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃