转移至硝酸纤维素滤膜前后进行的RNA染色

当RNA自琼糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜之前，溴化乙锭的染色时间一般不宜过长，这是因为被染料饱和的核酸分子，其转移效率有所降低。然而，用溴化乙锭作短暂染色，既不至于对核酸转移过程产生可以察觉的掏作用，又独具同时检测凝胶和凝膜上的RNA的优点。

１．方法Ⅰ １）电泳结束后，含乙二醛－DMSO的凝胶应浸入含溴化乙锭（0.5μg/ml）的10mmol/L磷酸钠（pH7.0）溶液。甲醛凝胶需用无RNA酶的水淋洗，用20xSSC溶液浸泡，随后用含溴化乙锭（0.5μg/ml）的20xSSC溶液染色。 ２）于室温染色5-10分钟，在紫外灯下观察，照像。 ３）按前所述方法， 将凝胶中的RNA转移至硝酸纤维素滤膜，转移后能常在学光下也可看出已染色的RNA条带。这种方法仅适用于每一泳道均含有相当大量（如5μg 以上）的RNA的情况。

２．方法Ⅱ　　硝酸纤维素滤膜上的当RNA自琼糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜之前，溴化乙锭的染色时间一般不宜过长，这是因为被染料饱和的核酸分子，其转移效率有所降低。然而，用溴化乙锭作短暂染色，既不至于对核酸转移过程产生可以察觉的掏作用，又独具同时检测凝胶和凝膜上的RNA的优点。

①．方法Ｉ １）电泳结束后，含乙二醛-DMSO的凝胶应浸入含溴化乙锭（0.5μg/ml）的10mmol/L磷酸钠（pH7.0）溶液。甲醛凝胶需用无RNA酶的水淋洗，用20xＳＳＣ溶液浸泡，随后用含溴化乙锭（0.5μg/ml）的20xSSC溶液染色。 ２）于室温染色5-10分钟，在紫外灯下观察，照像。 ３）按前所述方法， 将凝胶中的RNA转移至硝酸纤维素滤膜，转移后能常在学光下也可看出已染色的RNA条带。

这种方法仅适用于每一泳道均含有相当大量（如5μg 以上）的RNA的情况。

②．方法Ⅱ　　硝酸纤维素滤膜上的RNA也可以用下述方法染色：从干烤后的硝酸纤维素滤膜上剪下所需的条带进行染色，也可以用经过杂交并经X光片曝光后的整张滤膜进行染色（A.Efstratiadis，未了表材料）。 １）将干燥的滤膜浸入5%冰乙酸中，于室温浸泡15分钟。 ２）再将滤膜转移至0.5mol/L乙酸钠（pH5.2）、0.04%亚甲蓝溶液中， 于室温浸泡5-10分钟。 ３）用水淋洗滤膜5-10分钟后，可见RNA分子量标准参照物带型锐利而poly(A)+mRNA为一模糊带型，由许多长度范围从500碱基以下至5kb以上的各种mRNA共同组成，mRNA的平均长度约为2kb。 也可以用下述方法染色：从干烤后的硝酸纤维素滤膜上剪下所需的条带进行染色，也可以用经过杂交并经X光片曝光后的整张滤膜进行染色（A.Efstratiadis，未了表材料）。 １）将干燥的滤膜浸入5%冰乙酸中，于室温浸泡15分钟。 ２）再将滤膜转移至0.5mol/L乙酸钠（pH5.2）、0.04%亚甲蓝溶液中， 于室温浸泡5-10分钟。 ３）用水淋洗滤膜5-10分钟后，可见RNA分子量标准参照物带型锐利而poly(A)+mRNA为一模糊带型，由许多长度范围从500碱基以下至5kb以上的各种mRNA共同组成，mRNA的平均长度约为2kb。