比一比 谁能做更好的荧光定量PCR

PCR无疑是目前最常用的实验室技术之一，而由PCR发展出来的定量PCR技术，不单有PCR的快速灵敏，还以专一性更高、可实时监控、可重复精确定量等优势而日益受到重视，越来越广泛应用于科研、检验、和诊断领域。比如像近期蔓延的猪流感之类的具有潜在高度危险的传染病等就需要快速和准确地判断病源和发展趋势，而定量PCR技术正好会逢其适，以其准确和快速的优势在各重要部门得到了广泛的采用。

目前市场上定量PCR技术相关的产品琳琅满目，但大家熟悉的主要是一些国际知名品牌，其实国内许多自主研发的产品近年来也获得了长足的发展，比如BioTeke公司的荧光定量系列产品就以其优良的品质和亲民的价格越来越受到国内用户的青睐，目前还可以申请试用装。

为了证明其荧光定量系列产品的品质，BioTeke公司特邀请了山东大学细胞发育遗传学实验室进行了BioTeke的SYBR GREEN I实时荧光定量产品和T公司的实时荧光定量试剂的比对实验。具体实验如下：

实验材料

小鼠肝脏组织

山东大学实验室提供样品cDNA

实验方法

RNA提取：Bioteke RNApure高纯总RNA提取试剂盒，操作步骤请参考说明书。

目的基因：小鼠管家基因β–actin,山东大学提供样品基因。

cDNA制备：测定小鼠肝脏总RNA浓度后，使用BioTeke Super RT Kit 制备20μl cDNA.操作步骤参照试剂盒说明书。

一步法荧光定量PCR：

Bioteke One-step SYBR real-time RT-PCR Kit

20μl反应体系包括：

10μl 2×One-step SYBR premixture，7.2μl RNA Free Water，0.4μl Primer F，0.4μl Primer R，1μl cDNA，1μl One-step RT。

二步法荧光定量PCR：

小鼠肝脏组织Bioteke 2×SYBR real-time PCR premixture Kit。 T公司荧光定量试剂。

20μl反应体系包括：10μl 2×SYBR premixture,8.2μl RNA Free Water，0.4μl Primer F，0.4μl Primer R，1μl cDNA。

T公司荧光定量试剂，20μl反应体系包括：10μl 2×T公司荧光定量试剂， 8.2μl RNA Free Water，0.4μl Primer F，0.4μl Primer R，1μl cDNA。

山东大学提供样品Bioteke 2×SYBR real-time PCR premixture Kit。

T公司荧光定量试剂，20μl反应体系包括：10μl 2×SYBR premixture ，4μl Primer F，4μl Primer R，2μl cDNA。 T公司荧光定量试剂，20μl反应体系包括：10μl 2×T公司荧光定量试剂， 4μl Primer F，4μl Primer R，2μl cDNA。

反应程序：95℃ 2min， 95℃ 10sec，60℃ 15sec，40个循环。