粗糙脉孢菌顺序四分子分析

 一、实验材料：

粗糙脉孢霉（lys+ 野生型）Neurospora crassa  CCTCC AF 2014012

粗糙脉孢霉（lys- 缺陷型）Neurospora crassa CCTCC AF 2014014

二、粗糙脉孢霉的性质与生活史：

粗糙脉孢霉属于真菌中的子囊菌纲，是低等的真核生物。每一菌丝细胞中含有几十个细胞核。是遗传分析好材料:子囊孢子是单倍体，其表型直接反应其基因型；一次只分析一个减数分裂的产物；体积小，易培养，繁殖快，一次杂交就能产生大量的后代，便于获得正确的统计学结果；能进行有性生殖，其染色体的结构和功能类似于高等动植物；更加重要的是，子囊孢子在子囊中的线性排列顺序与减数分裂中期染色体在赤道板两侧的排列顺序相同，这就是粗糙脉孢霉成为了遗传分析的好材料。

三、着丝粒作图与遗传分析：

利用四分子分析法，测定基因与着粒间的距离称为着丝粒作图。

着丝粒作图是基于这样的事实：减数分裂中在同源染色体的一对非姊妹染色单体的着丝粒和某杂合基因座间有没有发生交换，和其产物四分子中的等位基因在排列方式上是不同的。可分为两种：

四、实验步骤：

1. 杂交接种与培养：

野生型菌株（Lys+，A）ⅹ缺陷型（Lys-，a）

2. 压片观察子囊：（注意观察时期）

1）将附有子囊果的滤纸放入装有来苏尔溶液的培养皿中

2）取一张载玻片，滴1-2滴来苏尔，用接种针将子囊果挑出，放在载玻片上

3）盖上另一张载玻片，用手指压片，将子囊果压破

4）显微镜观察，统计各种类型子囊的数量，每人统计200个左右的子囊

教学建议：

五、教学建议

粗糙脉孢霉培养基（PDA 培养基）

马铃薯浸取液1L

[注] 马铃薯浸取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0升。

葡萄糖20g

琼脂15g

自然pH

按上述配方配制PDA培养基，也可以通过试剂公司购买合成的PDA培养基，按说明书配制。

粗糙脉孢霉杂交培养基

斜面的配制：按比例取用上述培养基，加入琼脂后需加热沸腾至琼脂完全溶解于马铃薯浸取液中，然后分装至试管。试管规格：18*180，每支试管加入10ml上述琼脂完全溶解的培养基液体。121度，灭菌20min。灭菌完成后

热迅速加入100ul赖氨酸(100mg/ml)溶液至每支试管，混匀后摆制斜面。

赖氨酸溶液的配制方法：取0.5g赖氨酸粉末溶解于5ml无菌水中,待完全溶解后取0.22um孔径的过滤器进行过滤除菌后备用。

最佳保存条件：不用于实验时，可于室温保存2周左右。