序列特异性 DNA 结合蛋白的亲和层析纯化实验-DNA偶联于溴化氰活化的琼脂糖上
材料与仪器盐酸 用前新鲜配制 溴化氰活化 Sepharose 4B (Pharmacia Biotech)步骤1) 制备标记的被连接的寡核苷酸探针2) 称出3
材料与仪器
盐酸 用前新鲜配制 溴化氰活化 Sepharose 4B (Pharmacia Biotech)
步骤
1) 制备标记的被连接的寡核苷酸探针
2) 称出3 g溴化氰活化的Sepharose 4B (1 g冻干树脂可得到终体积约3. 5 mL的凝胶体积)。
3) 将干树脂置于一个15 mL的锥形聚丙烯管中。用10 mL lmmol/L盐酸水化树脂，弹击及来回颠倒管子以轻轻混匀。1 min后，将浆状树脂移入一个60 mL粗烧结玻璃漏斗中，缓缓倒入500 mL 1 mmol/L盐酸流过漏斗以洗涤和溶胀树脂（这个过程将花费约 15 min)。
4) 用100 mL水洗涤树脂，然后用100 mL 10 mmol/L, pH 8.0的磷酸钾洗涤。
5) 将寡核苷酸偶联于溴化氰活化Sepharose 4B上
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