抗体或蛋白质中硫基的引入实验

步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」

在氮气条件下，每 1 ml 抗体或蛋白质溶液加入 0.1 ml AMSA 溶液，密封试管并在室温下缓缓搅拌 0.5 h。为移除乙酰基并暴露硫醇基团，需加入溶于 0.1 mol/L pH 7.0 Tris-HCl 的 0.2 ml 0.5 mol/L 羟胺、0.01 mol/L EDTA，调整至 pH 7.0。30℃ 放置 4 min。将混合物过柱（交联葡聚糖）并用 0.1 mol/L pH 6.0 的磷酸二氢钾及 5 mmol/L EDTA 洗脱。收集蛋白质组分（280 nm 下测定吸收值）并通过超滤浓缩至 1 ml。

常见问题

试剂：

AMSA 溶液（S-乙酰疏基丁二酸酐；Mr＝174.2；60 mg 溶于 1 ml N，N'-二甲基甲酰胺）

0.1 mol/L 磷酸二氢钾，pH 7.0

抗体或蛋白质溶液（IgG，10 mg/ml 溶于 0.1 mol/L 磷酸二氢钾，pH 7.0）

氮气

0.5 mol/L 羟胺（NH2OH·HCl，Mr＝69.5），0.01 mol/L EDTA（Mr＝292.3）溶于 0.1 mol/L Tris-HCl pH 7.0（3.46 g NH2OH·HCl，0.29 g EDTA 溶于 100 ml 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸二氢钾）

交联葡聚糖 G-25 色谱柱，约 1.5 cm×30 cm，用 0.1 mol/L pH 6.0 磷酸二氢钾平衡

5 mmol/L EDTA