乙醇脱氢酶的测定实验-氧化反应测定
原理乙醇 + NAD+ ⇌ 乙醛 + NADPH + H+由于平衡易向正方向移动，逆反应的抑制必须加入碱性的 pH 试剂以及另一种试剂来捕捉乙醛，以便将产物从平
原理
乙醇 + NAD+ ⇌ 乙醛 + NADPH + H+
由于平衡易向正方向移动，逆反应的抑制必须加入碱性的 pH 试剂以及另一种试剂来捕捉乙醛，以便将产物从平衡中移走。
材料与仪器
乙醇脱氢酶稀释溶液甘氨酸-二磷酸钠溶液 磷酸钾 乙醇 NAD BSA 溶液 氨基脲
分光光度计
步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」0.98 ml 实验混合物
0.02 ml ADH 稀释溶液
25℃ 时，于 340nm 处吸收值降低。NADH 的吸收系数 ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。
常见问题
试剂：
75 mmol/L 甘氨酸-二磷酸钠溶液 pH 9.0（10 g Na4P2O7· 10 H2O＋0.5 g 甘氨酸溶于 300 ml H2O，用 1 mol/L HCl 调节至 pH 9.0）
0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.5
乙醇，p.A.（Mr＝46.1，d＝0.81 g/ml）
0.1 mol/L NAD（0.633 g 溶于 10 ml 0.1mol/L 磷酸钾，pH 7.5）
0.1mol/L 1，4-二硫代赤藻糖醇（DTE，Mr＝154.3，154 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.5）
0.1 g BSA 溶于 100 ml 0.1 mol/L磷酸钾，pH 7.5（BSA 溶液）
2.2 mol/L 氨基脲（Mr＝11.5，2.5 g 氨基脲-HCl 溶于 10 ml 2mol/LNaOH，用 5mol/L NaOH 调节 pH 到 6.3～6.5）
ADH，稀释同前
相关文章
