用非同位素探针进行原位杂交和检测实验-地高辛标记探针的信号放大
材料与仪器10μg ml 羊抗地筒辛抗体 Fab 片段 溶于 4SSC 1% m VBSA (组分V) 地高辛信号放大溶液：3. 5〜7. 0 ug ml荧光素
材料与仪器
10μg ml 羊抗地筒辛抗体 Fab 片段 溶于 4×SSC 1% m VBSA (组分V) 地高辛信号放大溶液：3. 5〜7. 0 ug ml荧光素标记的兔抗羊IgG (Sigma) 溶于 4×SSC 1% m V BSA (组分 V)
Parafilm 膜 玻片
Parafilm 膜 玻片
步骤
1) 用地高辛标记的探针与切片杂交并洗片。
2) 加50μL 10 /ng/ml的羊抗地高辛抗体Fab片段于玻片上，盖以22 mm2大小的Para- film 膜，置 37℃温育 30 min。
3) 移去Parafilm 膜，分别在 4×SSC、0.1 % Triton×-100/4 ×SSC、4×SSC 中洗片， 每次15 min。
4) 吸去残余4×SSC，加50μL地高辛信号放大溶液于玻片上，盖以22 mm2的Para- film膜，放加湿盒中。加湿盒外裹以铝箔，置37℃温育30 min。
5) 重复步骤3洗片。
6) 复染，固定并镜下观察结果
相关文章
