合成培养基配制实验-无血清培养基的制备

ECM
蒸馏水
滤膜

步骤

1.  选择适宜的培养基质（ECM），先制备成贮存干液；
2.  使用前，贮存干液用高纯度的蒸馏水稀释成0.1 mg/ml 浓度的使用液；
3.  使用液用0.22 μm 孔径的微孔滤膜过滤除菌；
4.  用吸管吸取使用液，均匀涂于消毒灭菌的细胞培养器皿的细胞生长表面。使用液的用量可按每平方厘米表面加50 μl的溶液，为保证其表面全部被溶液浸湿，用量可适当增减；
5.  室温下静置5 分钟（使用胶原做基质时，可适当延长时间至24 小时），然后吸出多余的溶液；
6.  再用灭菌蒸馏水（100 μl/cm2）洗涤涂有ECM的表面，然后尽量将水分吸净控干；
7.  根据不同细胞生长特点，接种适宜浓度的细胞进行培养。

注意事项

1.  制备过程要在严格无菌条件下进行。

常见问题

一、自制无血清培养基举例
1.  小鼠胚胎癌细胞系培养基
DMEM/F12，1：1 混合成1000 ml；NaHCO3，2.4 g；HEPES（1.5 M），10.0 μl；硒酸（5×－6 M），10.0 μg；纤粘连蛋白，1 μg/cm2（37℃作用15—30 分钟）；胰岛素，1000.0 μg；转铁蛋白，5000.0 μg。
2.  NIH3T3 小鼠成纤维细胞培养基
DMEM/F12，1：1 混合；HEPES，15 mM；大豆胰酶抑制剂，0.1%；胰岛素，10.0 μg/ml；转铁蛋白，25.0 μg/ml；纤粘连蛋白，5.0 μg/ml。
3.  人支气管上皮细胞培养基
DMEM/F，1：1 混合；HEPES，15 mM；硒酸钠，2.5×10－8 M；胰岛素，5.0 mg/ml；胰高血糖素 0.2 μg/ml；维A酸10－9 M（或三碘甲状腺原胺酸5×10－10 M）。
4.  正常人乳腺上皮细胞培养基
MCDB170 基础培养液；胰岛素，5.0 μg/ml；氢化可的松，0.5 μg/ml；表皮生长因子（EGF），5.0 mμg/ml；乙醇胺，10－4 M；磷酸乙酸胺，10－4 M；转铁蛋白，10 μg/ml；牛垂体提取物，70 μg/ml。
5.  杂交瘤细胞系培养基
DMEM/F12，1：1 混合；NaHCO3，1.2 g/L；HEPES，15.0 mM；胰岛素，5.0 μg/ml；氨基乙醇，20.0 μM；硒酸，2.5 mM；转铁蛋白，35.5 μg/ml。
以上仅是个别实验室的应用配方，但仍有很大的参考意义。然而某一种成分是否必需，并不是绝对的，用量也可以变更。如杂交瘤细胞无血清培养基可去除氨基乙醇；转铁蛋白降至每毫升5 微克，同样也能获得继续分泌抗体的结果。