动物活体光学成像-模式动物的麻醉操作与处死方法

实验动物的麻醉：常用的全身麻醉药从物理性质上可分为挥发性麻醉剂，如乙醚、氟烷、甲氧氟烷等；非挥发性麻醉剂，如巴比妥类、氯胺酮、水合氯醛、安定和一些新型的复合麻醉剂，如速眠新、速麻安等。从麻醉途径上可分为吸入性麻醉剂，主要为上述的挥发性麻醉剂；静脉注射麻醉剂，如戊巴比妥钠、氯胺酮等；肌内注射麻醉剂，如速眠新、速麻安、安定等。从作用机制上，可分为中枢抑制性麻醉剂，如乙醚；镇静催眠药，如巴比妥类麻醉剂；镇痛麻醉剂，如氯胺酮；复方动物制动剂，如速眠新、速麻安。小鼠、大鼠、豚鼠等动物体型小，易于保定，腹腔注射容易，且起效较快。兔耳缘静脉明显，且温顺，不需保定即可进行静脉注射麻醉。对于易伤人的犬、猫和体型较大、不易保定的猪，可先通过肌内注射速眠新、速麻安、氯胺酮或安定，待其肌肉松弛、不具有反抗力时，再视麻醉程度和实验需要，对其进行静脉麻醉，犬、猫一般通过后肢的小隐静脉注射，猪一般通过耳缘静脉注射。

材料与仪器

实验动物：小鼠、兔子、犬

试剂：异氟烷、水、普鲁卡因注射液、苯巴比妥钠、戊巴比妥钠

耗材和器械：脱脂棉花、烧杯、针筒、普鲁卡因注射液、剪刀、金属探针、注射器、止血钳

步骤

实验动物的麻醉方法：

1、吸入麻醉法：此法常用的麻醉药品是异氟烷。往挥发罐中加入异氟烷，打开麻醉机相应通道开关，将要麻醉的实验动物放入诱导盒中，约 2-3 分钟即可。挥发性麻醉剂的优点是麻醉的深浅容易控制，缺点是麻醉的时间不会持续太长，动物容易清醒。

2、静脉注射法：对狗和兔常用的方法。麻醉狗时，应先将嘴扎住，防止咬人。常用的静脉是后肢小腿外则的小隐静脉，前肢内侧的头静脉。麻醉兔时，用耳缘静脉。这种麻醉法用法较简单，动物可连续被麻醉 3-4 小时或更多时间。

3、腹腔麻醉法：此法对鼠类常用，在进行腹腔注射麻醉药时，要抓住颈后皮肤皱褶，控制头部移动防止咬伤，迅速将注射针头刺入腹腔，注射完毕立即退出针头。注射时，要避免把针插入胸腔或膀胱，否则会造成动物的死亡或麻醉过浅。

实验动物的处死方法：

1、急性失血法：此法应用于大鼠和小鼠等小动物时，常是剪断动物的股动脉，放血致死。此外，还可以采用摘眼球法，在鼠右侧或左侧眼球根部将眼球摘去，使其大量失血致死。如果是犬、猫或兔等稍大型动物应先使动物麻醉、暴露股三角区或腹腔，再切断股动脉或腹主动脉，迅速放血。动物在 3-5min 内即可死亡。采用急性失血法动物十分安静，对动物的脏器无损害，但器官贫血比较明显，若采集组织标本制作病理切片时可用此法。

2、断头法：适用于鼠类等小动物，可用直剪刀，也可用断头器。断头法处死动物时间短，并且脏器含血量少，若需采集新鲜脏器标本可采用此法。断头法会引起血液循环的突然中断和血压的迅速下降并伴随意识的消失，只能用于恒温动物。对于变温脊椎动物不推荐用断头法，因为它们相对能更高的抵制缺氧。

3、空气栓塞法：当空气注入静脉，可阻塞其分支，进入心脏冠状动脉可造成冠状动脉阻塞，发生严重的血液循环障碍，动物很快死亡。此法适用于较大动物的处死，家兔、猫用此法需注入 20-40mL 空气，犬致死的空气剂量为 80-150mL。由于应用此法后，动物死于急性循环衰竭，所以各脏器淤血十分明显。

4、断髓法此法适用于小鼠、大鼠等小动物。用于家兔时可敲击延髓致死，用木锤用力锤动物的后脑部，破坏延脑，动物痉挛后死亡，简单迅速。用于蟾蜍、蛙类可直接捣毁脊髓，将金属探针插入枕骨大孔，破坏脑脊髓使动物死亡。

5、化学药物致死常用安乐死药物有：吸入式麻醉剂（包括二氧化碳、CO、乙醚、三氯甲烷等）、氯化钾、巴比妥类麻醉剂、二氯二苯三氯乙烷（DDT）等，通过药物吸入或者药物注射的方法注入到体内。

注意事项

麻醉者要根据动物体重、药物浓度，仔细计算好所需的麻醉药物剂量。为了计算方便，将戊巴比妥钠以无菌生理盐水配成 3% 的溶液，按照通常的剂量 30mg/kg 体重，可换算 1ml/kg 体重。在静脉注射麻醉时，不可将药物一次性快速推入，而是间歇性地缓慢推进，在注射到预定剂量 3/4 后，更要减慢推进速度，并一边注射，一边观察动物的角膜反射、肌松程度和疼痛反应，达到实验所需麻醉状态时，立即停止药物的注射。为了防止麻醉后的动物（主要是大动物，如猪、犬等）因呼吸道阻塞而窒息死亡，最好在麻醉后、实验前进行气管插管，以保持其呼吸道通畅，并尽可能随时监控动物的血压、脉搏情况。