动物活体光学成像-发光检测实验

实验应用：

1.水质毒素检测；

2.基于水母素的 Ca2+ 浓度测定；

3.ATP 发光检测；

4.快速筛选阳性细胞或阳性克隆；

5.绘制标记物的发光梯度或曲线；

6.细胞生物发光效率测试。

材料与仪器

管式发光检测仪或板式发光检测仪（灵敏度：≤10amol ATP或≤20zmol 荧光素酶），离心机

步骤

1、取出待检测细胞，弃培养基，加入 PBS 缓冲液（无菌），清洗 2-3 次；

2、加入适量胰酶消化细胞（10cm 皿加入 1mL 胰酶；6cm 皿加入 0.5mL 胰酶）。若悬浮细胞，则无需胰酶消化，可直接从第 5 步开始；

3、显微镜下观察细胞明显收缩，或用移液枪吹打，细胞刚好可以被吹打下来，即消化完成；

4、加入 1-2 倍体积含血清的培养基，终止消化；

5、用移液枪吹散细胞，把细胞悬液转移到 15mL 离心管中；

6、1000rpm 离心 3min；

7、弃上清，加入 1mL 含血清的培养基，重悬细胞；

8、吸取适量细胞悬液，加入到无菌 5mL 离心管或 96 孔板；

9、放入管式发光检测仪或板式发光检测仪中检测。

10、再加入 15-0.3 mg/mL D-荧光素，混匀，放入管式发光检测仪或板式发光检测仪中检测；

11、结果分析，若数值大于加入底物前测量值，则为阳性。