细胞培养知识和技术

1、细胞（组织）培养年鉴

1878 Claude Bernard:证明一个器官的生理系统在个体死亡以后仍然可以人工维持。

1885 Wilhelm Roux:在一个生理溶液中维持一快鸡胚的活性并观察其发育，从而证实该发育与鸡胚的其他部分无关。

1887 Ross Harrison:利用凝固的青蛙淋巴液作为培养基，在体外培养青蛙神经嵴，维持其活性达数星期，并观察到了神经纤维的生长，从解决了神经纤维的来源问题。Ross Harrison被人称为细胞培养之父。

1910 Burrows:率先在血浆凝块中长期培养鸡胚细胞.

1911 Lewis & Lewis:由海水、血清、胚胎提取物和盐和蛋白胨为原料配制成了第一个人工的细胞培养液，并观察到了单层细胞的有限生长。

1916 Rous & Jones:开创使用胰酶来收获贴壁生长的细胞。

1923-1931 Carrel & Baker:研制T型培养瓶大规模培养细胞。

1927 Carrel & Rivera:制造了第一个病毒疫苗：牛痘疫苗。

1933 Gey: 发明了转管培养细胞的技术。

1948 Fisher: 研制成了第一个化学成分清楚的细胞培养液CMRL1006，该培养液至今还在使用。

1952 Gey 和同事：分离培养了Hela细胞。

1952 Dulbecco:发明了噬斑法，用长满的单层细胞检测病毒。

1954 Abercrombie: 观察到了体外培养细胞接触抑制的现象。

1961 Hatflick & Moorhead：显示人成纤维细胞在一定的代数之后会死亡。

1965 Ham:配制了第一个无血清培养液。

1975 Kohler & Miltein:成功的得到了第一个用于单抗生产的杂交瘤细胞株。

2、怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？

ATCC (American Type Culture Collection) 收集了绝大多数常用细胞的详细资料。

打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接，输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。

数据库中有每一种细胞的详细描述，包括细胞的来源，培养和冻存条件，显微形态以及相关文献等资料。

3、为什么大多数细胞培养需要用二氧化碳培养箱?

一般细胞培养液的pH在7.0-7.4之间。由于碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统（它是人体血液中最重要的pH缓冲系统），所以大多数培养液用它来保持稳定的pH。用粉末配制培养液时，常常需要加入一定量的碳酸氢钠。

对大多数以碳酸盐作为pH缓冲系统的培养液而言，以为了维持稳定的pH，培养箱中的二氧化碳需要维持在2-10%之间，以保持培养液中溶解的二氧化碳的浓度。同时细胞培养的器皿需要一定程度的透气，以便于气体的交换。

是不是采用其他pH缓冲系统就不需要二氧化碳培养箱了呢？人们发现由于空气中的二氧化碳浓度很低，如果细胞不在二氧化碳培养箱中培养，培养液中的HCO3-会被耗尽，这样会影响细胞的正常生长。所以大部分动物细胞的培养，还是需要二氧化碳培养箱。

细胞培养液中常附加其他的pH缓冲系统，比如HEPES缓冲系统，来增加pH缓冲能力。HEPES在pH7.2-7.4之间有很强的缓冲能力，当透气的培养器皿被拿到二氧化碳培养箱外面的时候，由于空气中二氧化碳浓度很低，培养液中碳酸盐缓冲系统就会失去效果，这时候HEPES缓冲系统就能继续保持pH的稳定。