休克实验-狗感染性休克法

狗感染性休克法是教学中用于研究休克的常见动物模型。感染性休克是指病原微生物（如细菌、病毒、真菌、立克次体等）感染所引起的休克，又称为脓毒性休克，是临床上常见的休克类型。革兰阴性菌感染引起的脓毒性休克在临床最为常见。

原理

狗感染性休克法的基本原理是由于脂多糖（LPS）在革兰阴性菌脓毒性休克发生中发挥重要作用，给动物注射LPS可导致脓毒性休克类似的表现，称为内毒素性休克（endotoxic shock）。地塞米松是一种糖皮质类激素，其药理作用主要是抗感染、抗过敏、抗风湿，临床使用较广泛。

用途

狗感染性休克法可用于观察内毒素休克时动物的表现及微循环变化、观察在注射内毒素前和注射内毒素后使用地塞米松所起到的抗休克作用。

材料与仪器

器材：

大动物手术器械一套，磅秤，狗手术台

BL-420生物信号采集分析系统，压力传感器，水检压计

微循环观察装置（解剖显微镜、灌流盒），普通光学显微镜

动脉导管和静脉导管，输尿管导管，载玻片，温度计

100 mL烧杯，10 mL、20 mL、50 mL注射器，止血纱布。

试剂：

①粗制内毒素（自制）；
②地塞米松注射液；
③3％ 戊巴比妥钠溶液；
④生理盐水；
⑤微循环灌流液（含1％ 明胶的台氏液）；
⑥0.3％ 肝素钠生理盐水溶液；
⑦95％ 酒精；
⑧Wright-Geimsa染色液。

步骤

狗感染性休克法的基本过程可分为如下几步：

A. 取成年狗一只、称重后静脉注射3％ 戊巴比妥钠溶液（30 mL／kg）全身麻醉。

B. 将动物仰卧固定于实验台上，剪去手术部位被毛，在甲状软骨下做颈部正中切口（长约6 cm），分离气管，做倒“T”形切口，插入“Y”形气管插管并固定，保证呼吸通畅；分离左侧颈总动脉，插入动脉导管，经压力传感器（插管前在动脉导管和压力传感器导管部分充盈肝素，以防止凝血后堵塞血压传导通路）与BL-420生物信号采集与分析系统相连，记录MAP、Ps-d、HR；分离右侧颈外静脉，插入静脉导管至上腔静脉入右心房处，接水检压计测量中心静脉压。

C. 在左侧股三角区沿动脉行走方向做一长约3 cm的切口，游离左股静脉，穿双线用来取血，作血抹片，观察血中以血小板为主的微聚物。

D. 在狗耻骨联合上方作下腹部正中切口（长约5 cm），找到膀胱后，将膀胱从腹腔中拉出，在背面膀胱三角区找到双侧输尿管入口，分离双侧输尿管并插入输尿管插管，记录尿量（滴／分）。

E. 在右侧腹直肌旁做一长约6 cm的腹部旁正中切口，钝性分离肌层，打开腹腔后，推开大网膜，找出一段游离度较大的小肠肠袢，轻轻拉出，置于微循环灌流盒内，用解剖显微镜观察肠系膜微循环情况。

F. 将温度计插入直肠，测体温改变。

G. 观察动物一般情况皮肤黏膜颜色及上述各项指标后，经右下肢皮下静脉在2 min内注入粗制内毒素（即灭活大肠杆菌E coli．O1B4）1 mL／kg（细菌浓度为1.0x1011个／mL），观察注射粗制内毒素后5、15、30、60和120 min时的上述各项指标。

注意事项

（1）尽量减少手术性出血，注意防止血管插管内凝血。
（2）牵拉肠袢要轻，以防引起血压降低。
（3）注射粗制内毒素前应将细菌沉渣摇匀，保证细菌能完全注入静脉。
（4）粗制内毒素最好新鲜培养，以免沉渣过多。