斑马鱼遗传修饰技术-Tol2转座子介导基因转移技术修饰斑马鱼基因

Tol2 转座子介导基因转移技术修饰斑马鱼基因，是使用在青鳉鱼中发现的 Tol2 转座子获取转基因斑马鱼。

材料与仪器

器材：

拉针仪、显微注射器、持针器和显微操纵器、体视显微镜

试剂：

mRNA 样品

步骤

Tol2 转座子介导基因转移技术修饰斑马鱼基因的基本过程可分为如下几步：

A. 将转座子供体质粒和一段编码转座酶的人工合成的 mRNA 一起注射到斑马鱼受粘卵中；

B.mRNA 翻译合成转座酶，该酶催化供体质粒中转座子结构的切除，并引导供体质粒中的外源基因与宿主基因组整合；

C. 随着 mRNA 和转座酶逐渐被降解，在其活性消失后，由于野生型斑马鱼中没有切除 Tol2 转座子的酶，Tol2 插入序列就会比较稳定；

通过杂交，在 Fl 后代中筛选含有 Tol2 插入序列的转基因斑马鱼。