肝功能不全实验-家兔实验性肝细胞性黄疸法

家兔实验性肝细胞性黄疸法研究肝功能不全的方法之一。

原理

家兔实验性肝细胞性黄疸法的基本原理是基于 CC14 引起肝细胞损伤，受损的肝细胞处理胆红素的能力减弱，导致正常代谢所产生的非结合胆红素不能全部转化为结合胆红素，引起血中非结合胆红素增加。而未受损的肝细胞，仍能将非结合胆红素转化为结合胆红素而输入毛细胆管；但这些结合胆红素可经坏死的肝细胞流入血液中，或因肝细胞肿胀、汇管区渗出性病变与水肿，以及胆管内胆栓，使胆汁排泄通路受阻，而致较多结合胆红素反流入血液循环中。其特点是血中非结合和结合胆红素均增高；尿中胆红素阳性，尿胆原常增加。

用途

家兔实验性肝细胞性黄疸法可观察肝细胞性黄疸动物的一般状况及血、尿改变，掌握此型黄疸胆色素代谢障碍的特点。

材料与仪器

器材：

注射器，小试管，滴管，吸管，移液器，手术器械一套，烧杯，兔台。

试剂：

①四氯化碳溶液（用花生油配制）；

②生理盐水；

③20％ 乌拉坦，碘酊（碘酒）；

④胆红素标准储存液；

⑤胆红素标准应用液；

⑥重氮试剂；

⑦无水乙醇；

⑧无水甲醇；

⑨氯仿；

⑩0.962 mol／L BaCl2 溶液；

⑪浓盐酸；

⑫0.0725mol／L 亚硝酸钠溶液。

步骤

家兔实验性肝细胞性黄疸法的基本过程可分为如下几步：

(一) 模型复制

家兔两只，一只为对照组，另一只为实验组，分别称重。实验家兔用 CCl4 灌胃，剂量为 3 mL／kg；对照家兔为生理盐水灌胃。

（二）观察与采血、尿

实验组家兔及对照组家兔在模型复制后 48 h 左右进行观察及采血、尿。动物用 20％ 乌拉坦 5 mL／mg 耳缘静脉注射麻醉，手术分离颈动脉，插管取血 1 mL，置清洁干燥试管中。2000r／min 离心 5 min，分离血清于另一试管中。下腹部做正中切口 3～5 cm，找到膀胱，注射器穿刺取尿约 6 mL。

（三）血清胆红素定量测定

（1）胆红素校正曲线制备：取试管 6 支按下表操作。

	空白	1	2	3	4	5
胆红素标准应用液／mL	-	0.1	0.4	0.8	1.6	3.2
空白试剂／mL	0.5	-	-	-	-	-
重氮试剂／mL	-	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
无水乙醇／mL	4.5	4.4	4.1	3.7	2.9	1.3
相当于血清胆红素／（μmol／L）	0	8.55	34.2	68.4	136.8	273.6

立即混匀，室温静置 30 min，540 nm 波长比色，以空白管调零，读取各管吸光度，算出回归直线或绘制校正曲线。（2）血清 1 min 胆红素和总胆红素测定：取试管 4 支，分别标明 1 min 胆红素空白管、测定管和总胆红素空白管、测定管。按下表操作。

	1 min 胆红素		总胆红素
	空白管	测定管	空白管	测定管
血清／m	0.2	0.2	0.2	0.2
空白试剂／mL	0.5	-	0.5	---
重氮试剂／mL	-	0.5	一	0.5
蒸馏水／mL	4.3	4.3	1.8	1.8
甲醇／mL	-	--	2.5	2.5

立即混匀，1 min 胆红素需准确记录 1 min。总胆红素室温静置 30 min，540 nm 波长比色，分别以各自空白管调零，读取测定管吸光度，代入回归直线或查找校正曲线即得，胆红素含量（μmol／L）＝17.10x（mg／mL）。

（四）尿胆红素定性实验

（1）方法一：取尿液 1 mL 左右，沿管壁缓慢加入碘酊 0.5 mL，若交界出现绿色环，则证明尿中有胆红素存在。（2）方法二：取尿液 1 mL 左右置于小试管中，加盐酸 1 滴，混匀后加 0.5％ 亚硝酸钠溶液（0.0725 mol／L）1 滴，摇匀立即观察颜色。深绿色为胆红素强阳性，绿色为阳性，淡绿色为弱阳性，尿液黄色消退为可疑，尿色不变为阴性。

（五）尿胆原定性实验

取尿液 2 mL 于小试管中，加 0.962 mol／L BaCl24～5 滴，3000r／min 离心 3 min 沉淀，以除去胆红素。吸取上清尿液 1 mL，用蒸馏水稀释成 1：10，然后取 5 mL 稀释成 1：20，并依次稀释成 1：40、1：80、1：160 共 3 管。取各稀释的尿液 5 mL 加入醛试剂 0.5 mL，于室温下静置 10 min 后，自管口向底部察看，观察时试管底部垫一白纸。尿液呈樱桃红色即为尿胆原阳性，以最高阳性稀释倍数报告结果。

注意事项

（1）家兔必须健康、成熟、体重适宜，否则易死亡。

（2）采血时试管一定要清洁干燥，以免溶血。溶血标本不能用作胆红素定量测定。

（3）做胆红素定量测定时，若血胆红素含量过高，超出校正曲线范围，可将血清先用生理盐水稀释再行测定，结果乘上稀释倍数。