早产动物模型-宫腔内直接感染诱寻的早产模型

宫腔内直接感染诱寻的早产是与细菌感染相关的内毒素、脂多糖等成分以及感染因子刺激局部组织产生的白细胞介素I（IL-1）、 肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor， TNF-α）等炎症细胞因子的释放，可促使子宫组织前列腺素（PGE2、PGF2α）分泌增多，继而引|起子宫收缩，导致早产。

用途

该模型可用于宫内感染与早产发病机制的研究。

材料与仪器

试剂：

① 细菌悬浮液；

实验动物：

① 6～ 8 周龄雌性小鼠（如 CD-1 小鼠）；

② 日本种大耳白兔。

步骤

宫腔内直接感染诱寻的早产模型的基本过程可分为如下几步：

1. 小鼠

（1）动物准备：6～8 周龄雌性小鼠（如 CD-1 小鼠）经阴道涂片检查以确定其动情期，将雌性小鼠在动情期与雄性（CD-1）小鼠放置在一起，以阴道出现阴道栓或精子作为妊娠的标志，于妊娠 d15 施行手术接种细菌。

（2）细菌悬浮液的准备：以大肠埃希菌（E.Coli）为例，将 E.Coli 菌株悬浮于液体培养基中，37 ℃ 培养一夜，分装后冷冻备用。实验前将其解冻，37°C 培养一夜，用培养液稀释成（2～10）x 104/ml 作为最终接种的细菌浓度。培养和稀释细菌均采用 LB 培养基。准备好的细菌悬液在 3 小时内使用。

（3）手术过程: 小鼠麻醉后，腹部消毒，沿下腹正中线切开，暴露一侧子宫角，将 0.1 ml 细菌悬浮液 [含（2～10）×103 个细菌] 自宫角注入宫腔。注意在两个胎鼠之间选择穿刺点，避免直接注入胎鼠。关闭腹腔后，将动物单个饲养于清洁饲养箱中，每天观察动物的分娩情况，记录手术至分娩的时间。48 小时内分娩一个以上胎仔即定为早产。

2. 兔

（1）动物准备及处理：采用日本种大耳白兔。

（2）菌液准备：取大肠埃希菌（E.coli）标准菌株（ATCC-25922 菌株）接种于血平板，37 ℃ 培养 16～18 小时，得到纯化的 E.coli，用生理盐水稀释，通过比浊法将菌液进一步稀释至 104/ml。

（3）手术步骤：可选择妊娠 d21～24 进行手术。消毒腹部，沿下腹正中线切开，暴露一侧子宫角，于孕兔两侧子宫角各注入 E.coli 标准株菌液 103（0.1 ml）。为了避免严重感染引起短时间内全部早产或母兔死亡，可同时静脉注射头孢唑林钠 [40 μg/(kg·d)]，连续用药 3 天。在细菌接种后 72 小时内胎儿娩出者定为早产。

注意事项

宫腔内或羊膜腔内直接接种细菌诱导早产是最常用的基础的早产动物模型，其造模过程接近宫内自然感染导致的早产过程。该模型制作时应注意选择合适的细菌接种量，接种过高可致动物死亡，接种过低则引导的早产不完全。大鼠难以诱导早产，所需细菌量大（107）。此外，无论哪种动物，细菌注射途径还可经宫颈通过导管注入或在腹腔镜下直接注入宫腔。