大鼠ES细胞技术-饲养层细胞（feeder）制备

胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）是指从桑椹胚或附植前囊胚内细胞团分离的一种多能性干细胞，是最经典的多能性干细胞，它位于个体发育的顶端，具有发育的全能性，能够分化为组成机体的所有类型的细胞，进而形成机体的任何组织和器官，并具发育成完整个体的能力。

材料与仪器

器材：

① 无菌手术器械

② 显微镜

③ 注射器

③ 培养箱、培养皿

试剂：

① 鼠

② trypsin/EDTA

③ MEF 培养基培养液

④ PBS、麻醉剂、以 70% 乙醇等

步骤

饲养层细胞制备的基本过程为:

1. 取复苏冻存的 MEFs 滋养层细胞，用小鼠成纤维细胞培养液按 4 x 10/c㎡ 的密度均匀接种于 6 孔培养皿中，置于 37 ℃，5% CO2 培养箱中培养过夜培养；

2. 次日更换为大鼠胚胎干细胞培养液，放入培养箱中备用。